Generation of monoclonal antibodies reactive with nuclear proteins of human primary breast tumors

Abstract

Nuclear proteins were extracted from purified nuclei of human primary breast tumors (BrT) and bladder tumors and of human normal breast, kidney and lymphocytes by enzymatic treatment. SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis of nuclear proteins from breast tumors showed different bands in the molecular weight zones from 25 to 220 kDa which were absent or present only as traces in normal breast tissue. Murine monoclonal antibodies (MAbs) have been produced using nuclear extracts of human primary breast tumors as immunogens. Approximately 2,000 hybridomas were generated from 5 hybridizations. According to their reactivity to BrT nuclear extracts and mammary carcinoma cell line MCF-7, seven hybridomas were selected and cloned. They were further characterized with histological immunoperoxidase assays of formaldehyde-fixed BrT paraffin tissue sections. MAb 6A3 particularly gave strong nuclear staining with all BrT specimens while MAb 1D8 showed both nuclear and cytoplasmic staining with only some of them. Specimens from mammoplasty did not react with these MAbs. Immunoblotting of BrT nuclear extracts as developed with MAbs 6A3 and 1D8 revealed major protein bands with molecular weight of 120 and 130 kDa. The potential use of these MAb-defined BrT-related nuclear proteins as markers for human breast cancer was suggested.

The use of a monoclonal antibody against a proliferating cell nuclear matrix antigen in the study of solid human tumors

“…A proliferating cell nuclear antigen, detected through the use of autoimmune sera (Miyachi etal., 1978; Takasaki et al, 1984a), was found to be identical to the nuclear protein "cyclin" ( (Gerdes et al, 1984; Freeman et al, 1986Freeman et al, , 1988Dinh et al, 1988).…”

“…These and other autoimmune antibodies have been used for the characterization of cells in the blood of leukemic patients Takasaki et al, 19846) and in some types of solid tumors . Monoclonal antibodies against different nucleoplasmic (Gerdes et al, 1983;Black et al, 1987) and nucleolar (Freeman et al, 1986(Freeman et al, , 1988Todorov et al, 1987;Chattejee et al, 1987) antigens, specific for proliferating cells, have been raised, and some of these antibodies have been used for the characterization of human solid tumors (Gerdes et al, 1984;Freeman et al, 1986Freeman et al, , 1988Dinh et al, 1988).…”

Μελέτη Των Πυρηνικών Πρωτεϊνών Στα Καρκινικά Κύτταρα Παχέος Εντέρου

“…Πολλοί ερευνητές, στηριζόμενοι στην ανωτέρω παρατήρηση και στις δομικές αλλαγές που υφίσταται η πυρηνική μήτρα από διαταραχές του εξωκυττάριου περιβάλλοντος λόγω ύπαρξης κακοήθους όγκου, επικεντρώθηκαν στη μελέτη και ανάλυση και bax, οι οποίες εμπλέκονται στη ρύθμιση της απόπτωσης218 , έχουν ήδη ρόλο προγνωστικών δεικτών για διάφορους καρκίνους136 .Σημαντική μελέτη αποτελεί και η παραγωγή αντισωμάτων που αναγνωρίζουν πρωτεΐνες της πυρηνικής μήτρας, ειδικές για ορισμένους τύπους καρκίνου. Ο Habets και οι συνεργάτες του το 1983219 και οι Kilianska Dipulio και Chiu το 1990220 , ανακάλυψαν αντισώματα ειδικά για ορισμένες πρωτεΐνες της πυρηνικής μήτρας, που ανιχνεύονταν σε ηπάτωμα ποντικών και απουσίαζαν από το φυσιολογικό ιστό ήπατος, ενώ το 1988 ο Dinh και οι συνεργάτες του ανέφεραν μονοκλωνικά αντισώματα που αντιδρούσαν με πρωτεΐνες πυρηνικής μήτρας κυττάρων από καρκίνο του μαστού221 . PAGE) και λαμβάνει χώρα σε συνθήκες σταθερής έντασης ρεύματος.…”