Extracción optimizada y purificación parcial de invertasa aislada de S. Cerevisiae en puré de durazno

Abstract

Resumen -La extracción fue realizada a través de un proceso de autolisis, donde las enzimas degradan las estructuras celulares y liberan el contenido citoplasmático al medio extracelular. El proceso de autolisis fue realizado en shaker con diferentes velocidades de agitación (50 -350 rpm) y concentraciones de bicarbonato de sodio (50 -350 mM NaHCO 3 ) a 40 °C por 24 horas, usando un diseño experimental compuesto central adaptado para dos variables y cinco niveles, así como una metodología de superficie de r e s p u e s t a (MSR) y análisis canónico para definir las condiciones óptimas de extracción de invertasa de S. cerevisiae aislada de puré de durazno (ISc). En la condición optima de extracción, se estudió el efecto de la liofilización y purificación en la actividad de la invertasa, usando el método colorimétrico del ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) a 490 nm para acompañar su actividad expresada en unidades. Una unidad (U) es definida como 1 mg glucosa.min -1 . El valor de proteínas fue cuantificado por el método Lowry y la invertasa de levadura comercial (ILC) como testigo. La influencia de la concentración de NaHCO 3 y de la velocidad de agitación en la extracción de la enzima invertasa indicó efecto lineal, cuadrático e interactivo. El modelo de forma polinómica de segundo orden explicó el fenómeno de extracción de la invertasa con un R 2 de 0,80, y con actividad significativamente dependiente de ambas variables. La máxima extracción fue observada en el punto central experimental (200 mM NaHCO 3 y 200 rpm) con una actividad de 14,7 U.mg -1 . El punto estacionario es un punto de máxima extracción, el cual difiere en menos de 10% del punto central experimental. De acuerdo a estas características, las óptimas condiciones para extracción de la invertasa de S. cerevisiae aislada de puré de durazno son 200 mM NaHCO 3 como agente de autolisis, 200 rpm de agitación orbital a 40 o C durante 24 horas y usando una biomasa de levaduras liofilizadas. El etanol es más efectivo que la acetona para la recuperación de la actividad específica. Términos para indexación: levadura; autolisis; MSR; análisis canónico. Optimized extraction and partial purification of S. Cerevisiae invertase from peach pureeAbstract -The extraction was performed using an autolysis process where enzymes degrade cell structures and release the cytoplasmic contents to the extracellular medium. The autolysis process was carried out in shake flasks with different agitation speeds (50 -350 rpm) and the concentration of sodium bicarbonate (50 -350 mM NaHCO 3 ) at 40 ° C for 24 hours, using a central composite design adapted for two variables and five levels and response surface methodology (RSM) and canonical analysis to define the optimal conditions of extraction of invertase S. cerevisiae from peach puree (ISc). In great condition extraction, we studied the effect of the liofilization and purified in the invertase activity using colorimetric method of 3,5-dinitrosalicílico (DNS) at 490 nm to monitor their activity. One unit (U) defined as 1 mg glicose....

Sustainable use of giant reed to produce industrialized enzymes

“…All tubes were incubated in a thermos bath at 25 °C for 10 min. The reaction was stopped by boiling in a water bath for 5 min and all tubes were placed in an ice bath for 1 min [ 14 ], the release of reducing sugars was determined by DNS [ 13 ].…”

Extraction, purification and characterization of invertase from Candida guilliermondii isolated from peach solid wastes

“…Invertase was extracted using the autolysis method as described by Ferreira et al (2018). To 100 g samples of lyophilized yeast, 300 mL 200 mM NaHCO 3 were added and the mixture was placed in stirring in an orbital shaker at 200 rpm and 40 °C for 24 h. The sample was then centrifuged at 2,025 g for 10 min.…”

“…The reaction was carried out at pH 5.0 and 25 °C. After 10 min, the content of RS was determined by 3,5-DNS using glucose as standard (Ferreira et al, 2018). One enzyme activity unit was defined as the amount of enzyme that leads to the increase by 1 µg RS as glucose.min -1 .…”

“…In another example, the external invertase is very stable when in contact with autolysis products between 40-45°C (ANDJELKOVIĆ et al, 2010;FERREIRA et al, 2018), but much of the mannan component content of external invertases can be removed. On the other hand, T < 40 o C favors mannan component, but decreases invertase content in extract.…”