Exploratory Study of the Long-Term Persistence of Yersinia pestis in the Cells of Soil-Inhabiting Ameba – Acanthamoeba Sp.

Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections] чума-зоонозная особо опасная природноочаговая болезнь, циркулирующая в природе на грызунах и их блохах. этиологическим агентом чумы является бактерия Yersinia pestis, которая вызывает эпизоотии чумы грызунов, приводящие к их массовой гибели. эпизоотические периоды во многих

Section: материалы и методыunclassified

Section: результаты и обсуждениеunclassified

Specific Appurtenance, Numbers, and Dynamics of Interaction of Acanthamoeba from Soils of Gorno-Altai High-Mountain Plague Focus with Yersinia pestis Strains

Оглодин¹,

Морозов²,

Nikiforov³

et al. 2017

“…подобные ассоциации являются экологической нишей, в которой многие бактериальные и грибковые патогены не только избегают стрессорного воздействия окружающей среды, но и размножаются с последующим выходом во внешнюю среду [6]. согласно литературным данным, возбудитель чумы способен сохраняться в клетках Hartmannella rhysodes [7], инфузорий Tetrahymena pyriformis [8,9], Dictyostelium discoideum [10], Acanthamoeba castellanii [11][12][13] от 2 дней до 14 месяцев.…”

unclassified

“…выживание Y. pestis напрямую зависит от условий сокультивирования (температура, влажность, среда культивирования, соотношение концентраций амеб и бактериальных клеток). эксперименты по изучению взаимодействия амеб и штаммов возбудителя чумы проводились в почве [9], жидкой среде, содержавшей органические вещества [8,13], в отсутствие влаги для имитации засушливых условий [11]. однако для того, чтобы выяснить закономерности взаимодействия и установить возможность длительного сохранения Y. pestis в клетках амеб, необходимо создать условия, при которых единственной стратегией выживания будет использование ресурсов простейших.…”

unclassified

Long-Term Persistence of <i>Yersinia pestis</i> in Association with Acanthamoeba castellanii in Experiment

Makashova

Оглодин

Куклева

et al. 2023

The aim of the study was to test the feasibility of long-term survival and preservation of the properties of Yersinia pestis in association with soil amoeba Acanthamoeba castellanii. Materials and methods. Y. pestis strains and acanthamoeba isolated in the common area of the Gorno-Altai high-mountain plague focus were used for the study. The systematic affiliation of protozoa was determined through analyzing the 18S rRNA gene fragment sequencing data, followed by alignment with amoeba sequences from the NCBI GenBank database. A fluorescent Y. pestis strain was obtained by electroporation using the pTurboGFP-B plasmid. Co-cultivation was carried out in saline buffer in the absence of nutrients for the cells of plague pathogen. The influence of co-culturing with protozoa on Y. pestis properties was determined using microbiological, biological, and molecular-genetic methods. Results and discussion. The cell viability preservation for 22 months of the experiment in Y. pestis strain belonging to the main subspecies of the antique biovar, the 4.ANT phylogenetic line in co-culture with amoeba cells in the absence of additional nutrients has been established. Co-cultivation with amoebae did not lead to a change in the cultural, morphological, genetic and virulent properties of the plague pathogen strain. The data obtained confirm the possibility of using Acanthamoeba castellanii by the plague microbe to persist in soil biocenoses and open up the prospect of studying the mechanisms of plague pathogen surviving during extended inter-epizootic periods.

“…в экспериментальных условиях установлена возможность длительного сохранения штаммов основного подвида в ассоциации с почвенными амебами Acantamoeba sp. и слизевиками Dictyostelium discoideum [7,8].…”

unclassified

Construction of <i>Yersinia pestis</i> Strain Producing Fluorescent Protein GFP and Prospects of Its Usage

Куклева¹,

Tuchkov²,

Оглодин³

et al. 2020

Получение штамма Yersinia pestis, ПродуцируЮщего флуореСцентнЫй БелоК GFP, и ПерСПеКтивЫ его иСПольЗования ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов, Российская Федерация цель работы-конструирование рекомбинантного штамма Y. pestis, продуцирующего флуоресцентный белок GFP, и анализ перспектив его использования для изучения взаимодействия возбудителя с простейшими, а также с макроорганизмом млекопитающих (грызунов). материалы и методы. для создания штамма, продуцирующего флуоресцентный белок GFP, использовали природный штамм Yersinia pestis, выделенный в 2016 г. в горно-алтайском высокогорном очаге чумы. ген флуоресцентного белка был введен в составе коммерческого вектора pTurboGFP-B методом электропорации. свойства полученного рекомбинантного штамма Y. pestis 367 pTurbo-GFP-B исследовали с помощью микробиологических, биологических и молекулярно-генетических методов. результаты и обсуждение. методом электропорации получен штамм возбудителя чумы, содержащий векторную плазмиду pTurboGFP-B, которая кодирует синтез зеленого флуоресцирующего белка GFP, и имеющий устойчивость к антибиотику ампициллину. сконструированный штамм Y. pestis, продуцирующий зеленый флуоресцентный белок, по своим культурально-морфологическим, биохимическим свойствам, вирулентности и выживаемости в смешанной культуре с акантамебами Acanthamoeba castellani не отличался от исходного. на плотных питательных средах рекомбинантный штамм и его субкультуры, полученные от зараженных животных, формировали колонии желто-зеленого цвета, флуоресцирующие при уФ-облучении. в препаратах, полученных от животных и из со-культур с амебами, наблюдали флуоресцирующие клетки возбудителя чумы. созданный штамм можно использовать в качестве модельного для изучения в лабораторных условиях взаимоотношений возбудителя чумы с клетками простейших (почвенные амебы, нематоды) и млекопитающих.