Experimental Transplantation of Cultured Human Limbal and Amniotic Epithelial Cells onto the Corneal Surface

Abstract

Cultured human keratocytes display many ultrastructural features of in situ keratocytes. These features are still present after reculture after cryopreservation. Cryopreservation induces necrosis in a small percentage of cells, which seems to be related to a relative lack of cell-membrane protection by the cryoprotectants used.

Ocular surface changes in limbal stem cell deficiency caused by chemical injury: a histologic study of excised pannus from recipients of cultured corneal epithelium

“…The newer modalities of treatment developed apart from conventional techniques of keratectomy, lamellar or penetrating keratoplasty, include epithelial transplantation procedures like limbal, kerato-limbal, or cultured corneal epithelial transplantation. [6][7][8][9][10][11][12][13][14][15][16][17] At our centre, patients clinically diagnosed with severe ocular surface disease due to limbal stem cell deficiency, with or without associated conjunctival damage, are treated with cultured corneal epithelium after surgical debridement of the diseased ocular surface pannus. We observed some unusual findings in the excised diseased ocular surface pannus among recipients of cultured epithelium, which prompted us to undertake a detailed histopathologic study of these tissues.…”

Cultivo primário de células epiteliais germinativas do limbo de olhos doadores

“…Pensando em minimizar o tamanho do tecido autógeno doador, técnicas de cultivo e expansão in vitro vêm sendo desenvolvidas (4)(5)(6)(7)(8)(9)11) . O cultivo de diversos tipos de células vegetais e animais é bem difundido em nosso país, com as mais variadas finalidades, desde testes da toxicidade de agrotóxicos até a fertilização in vitro.…”

“…Porém desenvolver técnica para algum tipo específico de célula, com suas necessidades particulares é um trabalho árduo. Existem diversos trabalhos publicados sobre o cultivo de células límbicas, porém nenhum com informações suficientes para a exata reprodução do experimento (4)(5)(6)(7)(8)(9)11) . Além disto, não dispomos de todos os ingredientes citados nestes trabalhos, sendo necessária a importação destes produtos com seus elevados custos financeiros.…”

“…Vários autores já demonstraram que suficientes células germinativas podem ser obtidas de biópsia do limbo de aproximadamente 2mm² (4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13) e após expandidas in vitro, serem transplantadas para o olho acometido, em alguns casos tendo como substrato a membrana amniótica humana. Esta técnica parece ser muito promissora, já que elimina o problema de tecido doador insuficiente, rejeição de transplantes homógenos e exaustão de células germinativas do olho doador.…”

Importância do co-cultivo com fibroblastos de camundongo 3T3 para estabelecer cultura de suspensão de células epiteliais do limbo humano

“…Alguns autores demonstraram que células epiteliais límbicas humanas podem ser cultivadas sobre a superfície côncava de lentes de contato de colágeno e transportadas para superfície de córneas de coelhos com 50% de sucesso (8) . Vários autores já demonstraram que células progenitoras epiteliais podem ser obtidas a partir de biópsia do limbo de aproximadamente 2 mm² (8)(9) e, depois de expandidas ex vivo sobre a membrana amniótica, serem transplantadas para o olho acometido (10) . Todas essas técnicas de transplante de células cultivadas ex vivo são promissoras, uma vez que diminuem o problema de tecido doador insuficiente e de rejeição (quando autoló-gos).…”