Cultivo primário de células epiteliais germinativas do limbo de olhos doadores

Abstract

Objetivo: Padronizar cultivo primário de células epiteliais germinativas do limbo de olhos doadores do Banco de Olhos da Santa Casa de São Paulo. Métodos: Por meio de biópsias de aproximadamente 4 mm² realizadas na região do limbo cirúrgico do anel córneo-escleral remanescente de olhos doadores, foram obtidos explantes, que passaram por métodos de dissociação para obtenção de células epiteliais germinativas do limbo, as quais foram semeadas em placas de cultivo celular e encubadas na estufa a 37°C em atmosfera a 5% de CO 2 . As placas foram observadas em 21 dias, sendo avaliadas a aderência, a morfologia e a multiplicação celular. Resultados: Observamos que as células no decorrer dos 21 dias multiplicaramse, passando da forma arredondada inicial ao processo de dissociação, para a forma poligonal como in vivo, além de demonstrarem maior aderência à placa de cultivo. Conclusão: Neste estudo foi possível demonstrar que o cultivo de células epiteliais límbicas in vitro pode ser realizado. Culture of limbal stem cells of donor eyes R E S U M O I N T R O D U Ç Ã OO epitélio corneal é um dos principais componentes da superfície ocular. Sua integridade e constante renovação são fundamentais para a manutenção da boa visão. É formado por epitélio escamoso estratificado, desprovido de células caliciformes, com camada basal de células cubóides apoiadas sobre a camada de Bowman. A córnea juntamente com a lágrima, é a principal responsável pelo poder refrativo do olho (43D), sendo de suma importância sua superfície manter-se uniforme. Segundo Thoft e Friends, criadores da Teoria XYZ (1) , o limbo constitui-se por um grupo de células epiteliais e germinativas distribuídas em camadas (e entre estas, células de Langerhans e melanócitos) e participa da renovação e manutenção desta superfície pela migração centrípeta destas células germinativas, que inicialmente desloca-se pelas camadas mais profundas do epitélio (X) e, à medida que se aproximam da região central da córnea tornam-se mais diferenciadas e ganham níveis mais superficiais (Y), até completarem seu ciclo vital entre 5 e 7 dias, descamando (Z) (1)(2) .Algumas doenças que comprometem a superfície ocular e o filme lacrimal, como a síndrome de Stevens-Johnson, penfigóide ocular cicatricial, queimaduras químicas e térmicas, doenças imunológicas, ceratopatias induzidas por radiação, crioterapia no limbo (iatrogênica), processos infecciosos graves, dentre outras, levam à diminuição do número de células germinativas do limbo corneal. Nestas condições, o limbo perde sua função de barreira limitante entre as células conjuntivais e a