Evaluation of Systems for Nopaline Synthase Terminator in Fast and Standard Real-Time PCR to Screen Genetically Modified Organisms

Sesame, Pistachio, and Macadamia Nut: Development and Validation of New Allergenic Systems for Fast Real-Time PCR Application

“…As shown in Table 5 , for sesame, pistachio, and macadamia nut, the real-time systems designed on 2S-albumin and vicilin-AMP genes appeared to be robust, with especially a concordance of 100% for the considered and analysed multi-factorial parameters [ 58 , 59 ].…”

“…The last dilution, where all 10 results gave amplification, was defined LOD 10 and was verified in 60 replicates together with the upstream or downstream dilution to define LOD 95 or the absolute LOD of the method, corresponding to a dilution point with at least 59/60 amplification signals. The amplification efficiency and linearity were represented respectively by slope and correlation coefficient R 2 of the regression line obtained with the first five dilutions used in the LOD 10 test [ 53 , 57 , 58 ].…”

“…In robustness assessment, the target sequence copy numbers or ng corresponds to the LOD value of the method multiplied by three [ 59 ]. A multi-factorial experiment design was carried out in triplicate, setting up two PCR runs: run 1 for the reference method and run 2 (A and B) on a different thermal cycler, which is a 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems ® , Foster City, CA USA), with different master mix concentrations (−10%), different primer and probe concentrations (−30%), different reaction volumes (A: +1 µL; B: −1 µL), and with an annealing temperature farther from the Tm (melting temperature) of primers [ 58 ].…”

Detección del promotor 35S mediante PCR tiempo-real: indicador de transgenicidad en alimentos y Gossypium sp.

“…Estados Unidos lidera la producción de CGM, los cuales abarcan actualmente alrededor de 75 millones de ha de la producción global; seguido por Brasil y Argentina (51,3 y 23,9 millones de ha respectivamente). En el 2018 se cultivaron doce CGM en veintiséis países (ISAAA, 2018).Como consecuencia del incremento global del área dedicada a CGM y sus derivados, los organismos reguladores de distintos países han promovido la necesidad de monitorear su presencia mediante técnicas eficientes a nivel de laboratorio (Pierboni et al, 2016;Eckerstorfer et al, 2019). Aproximadamente sesenta países poseen normativas para el etiquetado de productos que contienen trazas de organismos genéticamente modificados (OGM) que excedan los estándares establecidos por su propia legislación (Leão-Buchir et al, 2018).…”

“…La detección por PCR en tiempo real, tanto cualitativa como cuantitativa, se basa en la identificación de secuencias específicas exógenas, como promotores, terminadores y secuencias codificantes presentes en los eventos transgénicos (Barbau-Piednoir et al, 2010;2012). Los elementos recombinantes más comúnmente encontrados en los cultivos GM son el promotor 35S (p-35S) del virus del mosaico de la coliflor (CaMV) y el terminador nopalina sintasa (t-NOS); ambas secuencias son reguladoras de la transcripción y forman parte de los constructos de la mayoría de los eventos aprobados para su comercialización internacional, siendo estos indicadores de material vegetal y alimentos procesados que contienen ADN recombinante (Datukishvili et al, 2015;Pierboni et al, 2016;Carvajal et al, 2017;Leão-Buchir et al, 2018).…”