Evaluation of Elution Parameters in Reversed Phase HPLC for the Determination of Niacin Vitameres and Metabolites

Abstract

Summary A procedure for separation of nicotinic acid (NIA), nicotinamide (NAM), nicotinuric acid (NUR) and N1‐methyl‐nicotinamide (NMN) from biological samples by isocratic HPLC is described. The effects a) of different buffer systems (citrate, acetate, propionate), b) of different pH values (between pH 2.4 and 3.35), c) of different ionic concentrations of the eluents (between 10 and 100 mM) and d) of different methanol concentrations added to the eluent on retention times of the four compounds were tested. Results were described by multiple regression equations which allow selection of suitable analytical conditions according to the specific composition of different biological materials. The procedure yielded satisfactory separation of NIA and NAM from various purified fractions of rumen and intestinal contents and blood. Zusammenfassung Der Einfluß verschiedener Elutionsparameter auf die Trennung von Niacinmetaboliten mit Reversed Phase HPLC Es wird eine Methode zur Trennung und Quantifizierung von Nicotinsäure (NIA), Nicotinamid (NAM), Nicotinursäure (NUR) und N1‐methyl‐Nicotinamid (NMN) mit isokratischer Reversed Phase HPLC beschrieben. Der Einfluß des pH‐Wertes (zwischen pH 2,4 und 3,35), der Ionenkonzentration (zwischen 10 und 100 mM) und der Methanolkonzentration auf die Retentionszeit der Substanzen wurde mit Standardlösungen systematisch untersucht. Bei drei Puffersystemen (Essigsäure/Acetat, Citronensäure/Citrat und Propionsäure/Propionat) war die Elutionsfolge der Komponenten ***NIA; NAM, NUR und NMN gleich. Die Effekte der Variation der einzelnen Elutionsparameter auf die Retentionszeiten der einzelnen Komponenten wird mit multiplen Regressionen beschrieben. Dieses erlaubt die Optimierung der Trennmethode im Hinblick auf den Gehalt an störenden Substanzen in verschiedenen biologischen Flüssigkeiten. Die Eignung dieser Methode zum quantitativen Nachweis von Nicotinsäure und Nicotinsäurederivaten in Blut, Pansen‐ und Duodenuminhalt von Schafen wird demonstriert.

Synthesis of nicotinamide-imprinted polymers and their binding performances in organic and aqueous media

“…These methods include spectroscopic technique [2][3][4], titration [5], microbiological methods [6] and HPLC [7][8][9][10][11][12]. For the analysis of complex biological samples, spectrometry and titration are not suitable, while microbiological methods are tedious and time-consuming.…”

Purification Procedure for the Determination of Niacin Vitameres in Gastrointestinal Contents and Blood

“…1 to 3 or 2 to 4 (according to the different solid phase columns) which contained the vitameres were combined, brought to dryness and redissolved in 500 p1 deionized water. An amount of 50 pl was analyzed by HPLC (10).…”