Evaluación de métodos de concentración y purificación de Giardia spp. a partir de muestras coprológicas

Abstract

El objetivo del estudio fue comparar diferentes métodos de concentración para recuperar la mayor cantidad de quistes de Giardia spp. a partir de muestras coprológicas. Se analizaron 100 muestras procedentes de hospitales de referencia nacional y se aplicaron cuatro métodos parasitológicos: concentración por sedimentación espontánea en tubo (TSET), Faust, gradiente de sucrosa de una fase y gradiente de sucrosa de dos fases. Se encontró que el método de gradiente de sucrosa de dos fases alcanzó resultados significativamente mejores en concentración de quistes (121 903 quistes/ml) y cantidad de detritos (6%), en comparación con los métodos de Faust (35 355 quistes/ml), concentración por sedimentación espontánea en tubo (20,145 quistes/ml) y gradiente de sucrosa de una fase (18 702 quistes/ml). Se concluye que el método más eficaz para la concentración y purificación de quistes de Giardia spp. a partir de muestras coprológicas es el método de gradiente de sucrosa de dos fases, lo que facilitaría los cultivos in vitro de Giardia spp.

Comparación de métodos de extracción de ADN de Giardia spp. medidos por PCR convencional

“…La literatura reporta que es necesario separar los quistes de los detritos presentes en las muestras fecales empleando el método de concentración por gradiente de sucrosa de dos fases (12)(13)(14) , para reducir la posible inhibición de la PCR ocasionada por los componentes de las muestras coprológicas como las sales biliares, proteínas, hemoglobina, lactoferrina, inmunoglobulinas, entre otros (9) , y obtener ADN intacto para obtener métodos comparables. Otro punto importante, es eliminar las sustancias derivadas de los procesos de extracción, que según los estudios el uso de columnas procedentes de kits comerciales facilita la purificación de ADN, disminuyendo la presencia de inhibidores químicos, alcanzando mayores tasas de amplificación a las obtenidas empleando una metodología convencional basada en fenol/cloroformo (8,21) .…”

“…Los quistes fueron purificados y concentrados por el método de gradiente de sucrosa de dos fases (12)(13)(14) . Las muestras de heces fueron emulsionadas con agua destilada y filtradas con gasa; previamente a un tubo de vidrio 16 x100 mm se colocó 3 mL de sucrosa 0,85 M, al que se le agregó igual volumen de la suspensión fecal y se centrifugó a 2300 rpm por cinco minutos; luego, se recuperó la fase sucrosa-agua y se realizaron tres lavados con agua destilada centrifugando a las mismas revoluciones descritas.…”