Etude de coupes ultrafines de globules rouges humains au microscope électronique

Bernhard, W; Leplus, R; Elbers, P.E.

doi:10.1159/000204558

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“…The microtomes used at that time, however, proved to be unable to guarantee reproducible results on all material. Cryo-ultramicrotomes presented in Rome in 1968 (Andrews & Stubbs, 1964;Bernhard et al, 1964;Bernhard & Leduc, 1967;Christensen, 1967;Appleton, 1968;Dollhopf, 1968) and their second generation presented in 1972 and later, brought effective improvements to these important instruments for electron microscopy (Persson, 1970;Lechner, 1974).…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Stabilizing ultrathin cryo‐sections by freeze‐drying

Geymayer

Grasenick

Hödl

1978

Journal of Microscopy

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Cryo-sectioning of specimens with high water content often proves to be especially difficult, as the sections of freeze-shocked samples with their minimal thermal capacity warm up easily. The resultant recrystallization of the included water causes considerable damage in the structure of the frozen specimens. The method described in this paper enables cryo-sections to be transferred from the microtome to a precooled high vacuum plant without contamination and at a temperature below the recrystallization point of ice. In this device the cold sections can be stabilized by freeze-drying, sandwiching or electron-bombardment for subsequent observation in the transmission electron microscope.

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Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Stabilizing ultrathin cryo‐sections by freeze‐drying

Geymayer

Grasenick

Hödl

1978

Journal of Microscopy

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Erythrocytenmorphologische Untersuchungsmethoden

Boroviczény¹

1968

Blut Und Blutkrankheiten

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Ais erythrocytometrische Werte bezeichnen wir MeBwerte und weitere daraus errechnete Parameter des Erythrocyten, die uns uber Anzahl, GroBe, Form, Hiimoglobinbeladung usw. der Erythrocyten Auskunft geben. Die Erythrocytenzahl, der Hiimoglobingehalt, der Hiimatokritwert und der Erythrocytendurchmesser werden im allgemeinen mit Hilfe der zu beschreibenden Methoden bestimmt; aus den so erhaItenen MeBwerten errechnet man den Fiirbekoeffizienten, die Hiimoglobinkonzentration, das Erythrocyteneinzelvolumen und die Erythrocytendicke. Diese acht Parameter ergeben in ihrem Zusammenhang wichtige Hinweise, die differentialdiagnostische und prognostische SchluBfolgerungen ermoglichen. Weitere ErythrocytenmaBe, wie das mittlere Gewicht des Einzelerythrocyten, Erythrocytenoberfliiche usw. konnen ebenfalls ausgerechnet oder bestimmt werden, haben aber keine so groBe Bedeutung. Erythrocytenzahl Entnahme und Verdiinnung des BIutes Blutentnahme und Herstellung der Verdunnung sind im Prinzip fur siimtliche Ziihlmethoden gleich, weswegen wir sie vor der Besprechung der einzelnen Ziihltechniken abhandeln konnen. Die Zellzahl wird im venosen Blut oder im CapiIlarblut festgestellt, wobei es bei rich tiger Abnahmetechnik keinen wesentlichen Unterschied bedeutet, woher das Blut entnommen worden ist. Darauf, daB man bei der Abnahme des Capillarblutes aus dem Finger richtig einstechen muJ3 und den Finger nicht quetschen darf, braucht an dieser Stelle wohl nicht eingegangen zu werden. Wenig beachtet wird, daB es bei einzelnen schweren hiimolytischen Aniimien schon bei der Blutentnahme zu einer Hiimolyse kommen kann. Fur die Kammerziihlung wird das Bllt 1: 20 (Leukocytenzahl) oder 1 :200 (Erythrocytenzahl) verdunnt. Fur die Ziihlautomaten mussen Verdunnungen bis zu 1: 80000 hergestellt werden. Bei der Herstellung der Verdunnung konnen die ersten, manchmal wesentlichen Fehler, auftreten. Fur die Kammerziihlung, aber auch fur einzelne Blutkorperchenziihlautomaten werden immer noch mit Vorliebe Melangeur-Pipetten verwendet. Dabei sind diese Pipetten oft iiuBerst ungenau (DRUCKREY und FROMME fanden Abweichungen bis zu 272 % I). Naturlich sind die heute von renommierten Firmen in den Handel gebrachten Pipetten wesentlich genauer, aber immer noch lange nicht so genau wie die im folgenden beschriebenen Pipetten und dazu iiuBerst schwer kalibrierbar. Wegen der Ungenauigkeit der Melangeur-Pipette empfahl A. HEGEDUS, in leere Penicillinfliischchen (in die er noch 1-2 Glasperlen tat) 0,95 bzw. 9,95 ml Verdunnungslosung zu pipettieren und 0,05 ml Blut mit einer Blutzuckerpipette einzuspulen. Diese Methode hat den Vorteil, daB man mit handelsublichen, leicht K. Betke et al. (eds.),

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Erythrocytenmorphologische Untersuchungsmethoden

Boroviczény¹

1968

Blut Und Blutkrankheiten

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Mit 69 Abbildungen Erythrocytometrische WerteAis erythrocytometrische Werte bezeichnen wir MeBwerte und weitere daraus errechnete Parameter des Erythrocyten, die uns uber Anzahl, GroBe, Form, Hamoglobinbeladung usw. der Erythrocyten Auskunft geben. Die Erythrocytenzahl, der Hamoglobingehalt, der Hamatokritwert und der Erythrocytendurchmesser werden im allgemeinen mit Hilfe der zu beschreibenden Methoden bestimmt; aus den so erhaltenen MeBwerten errechnet man den Farbekoeffizienten, die Hamoglobinkonzentration, das Erythrocyteneinzelvolumen und die Erythrocytendicke. Diese acht Parameter ergeben in ihrem Zusammenhang wichtige Hinweise, die differentialdiagnostische und prognostische SchluBfolgerungen ermoglichen. Weitere ErythrocytenmaBe, wie das mittlere Gewicht des Einzelerythrocyten, Erythrocytenoberflache usw. konnen ebenfalls ausgerechnet oder bestimmt werden, haben aber keine so groBe Bedeutung. Erythrocytenzahl Entnahme und Verdiinnung des BlutesBlutentnahme und Herstellung der Verdunnung sind im Prinzip fur samtliche Zahlmethoden gleich, weswegen wir sie vor der Besprechung der einzelnen Zahltechniken abhandeln konnen. Die Zellzahl wird im venosen Blut oder im Capillarblut festgestellt, wobei es bei rich tiger Abnahmetechnik keinen wesentlichen Unterschied bedeutet, woher das Blut entnommen worden ist. Darauf, daB man bei der Abnahme des Capillarblutes aus dem Finger richtig einstechen muB und den Finger nicht quetschen darf, braucht an dieser Stelle wohl nicht eingegangen zu werden. Wenig beachtet wird, daB es bei einzelnen schweren hamolytischen Anamien schon bei der Blutentnahme zu einer Hamolyse kommen kann.Fur die Kammerzahlung wird das Bllt 1: 20 (Leukocytenzahl) oder 1 :200 (Erythrocytenzahl) verdunnt. Fiir die Zahlautomaten mussen Verdunnungen bis zu 1: 80000 hergestellt werden. Bei der Herstellung der Verdunnung konnen die ersten, manchmal wesentlichen Fehler, auftreten.Fur die Kammerzahlung, aber auch fur einzelne Blutkorperchenzahlautomaten werden immer noch mit Vorliebe Melangeur-Pipetten verwendet. Dabei sind diese Pipetten oft auBerst ungenau (DRUCKREY und FROMME fanden Abweichungen bis zu 272% !). Naturlich sind die heute von renommierten Firmen in den Handel gebrachten Pipetten wesentlich genauer, aber immer noch lange nicht so genau wie die im folgenden beschriebenen Pipetten und dazu auBerst schwer kalibrierbar. Wegen der Ungenauigkeit der Melangeur-Pipette empfahl A. HEGEDUS, in leere Penicillinflaschchen (in die er noch 1-2 Glasperlen tat) 0,95 bzw. 9,95 ml Verdunnungslosung zu pipettieren und 0,05 ml Blut mit einer Blutzuckerpipette einzuspulen. Diese Methode hat den Vorteil, daB man mit handelsublichen, leicht L. Heilmeyer et al. (eds.), Blut und Blutkrankheiten

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Etude de coupes ultrafines de globules rouges humains au microscope électronique

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Stabilizing ultrathin cryo‐sections by freeze‐drying

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