Introdução: A adoção de cuidados com o trabalhador por parte das organizações tem sido tema de diversos estudos. Os hospitais constituem espaços estratégicos para que ações de promoção de saúde sejam desenvolvidas. Objetivos: Analisar os efeitos de um programa de ginástica laboral na qualidade de vida de trabalhadoras de instituição hospitalar. Métodos: Trata-se de um estudo analítico exploratório longitudinal. Para a coleta de dados foram utilizados: questionário sociodemográfico, avaliação da ginástica laboral, WHOQOL-BREF e Questionário Nórdico Musculoesquelético, ambos aplicados antes e após a realização do programa de ginástica laboral. O programa para as trabalhadoras de serviços gerais foi realizado por 15 semanas, 3 vezes por semana. Resultados: Após a intervenção observou-se uma melhora significativa para os domínios Físico (p = 0,0001), Psicológico (p = 0,0001), Relações Sociais, (p = 0,0220), Meio Ambiente (p = 0,0001) e Qualidade de vida geral (p = 0,039). Todavia, para os domínios Meio Ambiente e Qualidade de Vida Geral, o incremento nos respectivos escores médios não foi suficiente para modificar as classes dos domínios de regular para boa. Quanto ao efeito da intervenção na sintomatologia dolorosa, verificada com a utilização do Questionário Nórdico Musculoesquelético, foi observada diminuição da dor nas regiões do pescoço (p = 0,0455) e joelho (p = 0,0455). Conclusões: A ginástica laboral proporcionou resultados positivos para as trabalhadoras e, portanto, sua prática deve ser estimulada, uma vez que auxilia na melhoria da qualidade de vida e promoção da saúde no trabalho. Palavras-chave: exercício físico; serviço hospitalar de limpeza; promoção da saúde.