ResumoA propagação in vitro de Paubrasilia echinata (pau-brasil) é de interesse ecológico e comercial, principalmente pelo fato de a espécie estar ameaçada de extinção. E, portanto, o objetivo dessa pesquisa foi estabelecer um protocolo eficiente de desinfestação e estabelecimento in vitro de embriões zigóticos (EZ) da espécie P. echinata. A sementes foram submetidas a desinfestação com fungicida por 40 minutos (min), álcool 70% (1 min), hipoclorito de sódio a 2,5% (10 ou 20 min), e, em duas soluções de nanopartículas de prata (AgNPS) (20 min). Aos 30 dias foi avaliado a porcentagem de contaminação (%C), porcentagem de sobrevivência (%S), e, comprimento da parte aérea (PA-mm). Aos 60 dias foi avaliado apenas o comprimento da parte aérea. O tratamento com menor taxa de contaminação foi o com 20 min no NaOCl e 20 min em solução de AgNPs com o estabilizador β-quitozan, com apenas 26,66% dos EZ contaminados. A %S foi estatisticamente igual nos tratamentos, tendo a maioria deles ficado acima de 83,33% de sobrevivência. Da mesma forma aos 30 e 60 dias a PA (mm) obteve médias estatisticamente iguais, com uma média de 5,63 mm aos 30 dias, e, 8,41 mm aos 60 dias de incubação.Palavras-chave: propagação. Paubrasilia echinata. Mata Atlântica. endêmica.Área do Conhecimento: Fisiologia.