ELISA com MSP5 recombinante truncada para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale em bovinos

Abstract

Os objetivos deste estudo foram produzir e solubilizar a proteína MSP5 recombinante truncada de Anaplasma marginale, e avaliar seu desempenho em um ensaio de imunoadsorção enzimática indireto (ELISA) para detecção de anticorpos contra a riquétsia. O gene msp5, exceto a região N-terminal hidrofóbica, foi amplificado por PCR, clonado em plasmídeo pTrcHis-TOPO e expresso em Escherichia coli. A solubilização da proteína recombinante foi avaliada em diferentes pHs e concentrações de uréia. A sensibilidade e a especificidade do ensaio foram avaliados testando-se 66 soros de animais infectados experimentalmente com A. marginale e 96 soros negativos, com o estado de infecção destes animais confirmado por PCR. Um total de 1.666 amostras de soros bovino, provenientes do Brasil - Rio Grande do Sul (73), Mato Grosso do Sul (91), Pernambuco (86), Bahia (314) e Minas Gerais (267)-, Uruguai (32) e Costa Rica (803) foram testadas nos ELISAs com MSP5 truncada e com MSP1a recombinantes e a concordância entre os dois testes foi avaliada. O ELISA indireto com MSP5 truncada foi capaz de detectar animais infectados com 96,97% de sensibilidade e 100% de especificidade. Nos animais infectados experimentalmente, o ELISA detectou anticorpos do 12º até o último dia de observação (37º dia). Os ELISAs para MSP5 e MSP1a apresentaram concordância de 95,67%, com índice kappa de 0,81. Os resultados discordantes apresentaram uma diferença significativa (p <0,001). Anticorpos contra A. marginale foram detectados em animais de todas as regiões estudadas. O ELISA com MSP5 recombinante truncada apresentou bom desempenho na detecção de anticorpos contra A. marginale, com alta sensibilidade e especificidade, representando uma importante ferramenta para o diagnóstico da anaplasmose bovina em estudos epidemiológicos.

Real-time polymerase chain reaction based on msa2c gene for detection of Babesia bovis

“…Intra-assay Inter-assay marginale using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Madruga et al, 2000a(Madruga et al, ,b, 2001) and conventional PCR for cytochrome b (Buling et al, 2007;Melo et al, 2007). From each dilution, DNA was purified from 350 l of blood using the Easy DNA kit (Invitrogen, USA) and used as the template for the q-PCR.…”

IgG and IgG2 antibodies from cattle naturally infected with Anaplasma marginale recognize the recombinant vaccine candidate antigens VirB9, VirB10, and elongation factor-Tu

“…Serum samples were from 72 Aberdeen-Angus cattle experimentally infected with Rio Grande do Norte homologous isolate of A. marginale; from 72 Anaplasmafree cattle, defined by PCR for MSP5 gene (Silva et al 2006); from 70 cattle naturally infected with this rickettsia from state of Alagoas, positive by indirect ELISA with MSP5 (Melo et al 2007); and from 72 seronegative cattle, all of which were analyzed by ELISAs with VirB9, VirB10, and EF-Tu for specific IgG.…”

Development and assessment of a latex agglutination test based on recombinant MSP5 to detect antibodies against Anaplasma marginale in cattle

“…Many of these recombinant proteins have been utilized in serodiagnosis of A. marginale with excellent results (Reyna-Bello et al , 1998; Melo et al , 2007). …”