Elektrophorese im klinischen Laboratorium

Geissen, Wilhelm; Schuler, Bruno; Schuster, Hans F.

doi:10.1007/bf01483005

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“…by dialysis in cellophan tubing against a 20-30% solution of Dextran in veronal buffer 1, and then dialysed against this buffer for 2 days at 5°. Electrophoresis was performed in an Antweiler micro-apparatus, as described by Geissen, Schuler & Schuster (1950) at protein concentration 1-2% for 20 mi. with a current of 1-8 mA and potential difference of 80-90v.…”

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confidence: 99%

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A comparative study of cerebrospinal fluid and serum proteins in multiple sclerosis with special reference to the Lange colloidal-gold reaction

Press

1956

Biochemical Journal

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Positive colloidal-gold reactions in the cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis have been reported as occurring in 29-81 % of fluids examined by various investigators (Freedman & Merritt, 1949). Coagulation of the colloidal gold has been shown to be associated with the y-globulin fraction (Kabat, Moore & Landow, 1942). The concentration of y-globulin in cerebrospinal fluid was determined immunochemically by Yahr, Goldensohn & Kabat (1954), who report an increase in 66-5 % of the multiple-sclerosis cases studied. The mechanism of several flocculation tests, including the colloidal gold at pH 7-8 and 6-6, was studied by Maclagan & Bunn (1947), using normal and hepatitis serum fractions; they found that albumin and a-and p-globulins protected the colloidal gold and that y-globulin brought about its coagulation.Serum diluted to 0-03 % protein gives a very strongly positive colloidal-gold reaction (Press, 1955), whereas a normal cerebrospinal fluid, having approximately the same concentration of albumin and globulins, gives a negative colloidalgold reaction; this is suggestive of a qualitative difference between the protein fractions of cerebrospinal fluid and serum.In the present study, the proteins of normal and pathological cerebrospinal fluids and normal sera have been compared both quantitatively and qualitatively. Cerebrospinal fluids and sera were analysed electrophoretically, and the percentage of y-globuhn in the cerebrospinal fluids was compared with the type of the colloidal-gold reaction. Albumin and ac-, 9and y-globulins have been isolated from sera and cerebrospinal fluid and the effect of these fractions on the collidal-gold reaction studied and their sedimentation constants determined.Partial fractionations of cerebrospinal-fluid yand f-globulins were performed in the ultracentrifuge and the effect on the colloidal-gold reaction of the more slowly sedimenting fraction was examined. The chemical nature of this 'slow' component from both fiand y-globulin was determined. Cerebrospinal-fluid y-globulin was also fractionated with 18 % sodium sulphate, and the sedirnentation constant of the fractions and their effect on the colloidal-gold reaction were determined. EXPERIMENTALMaterials Veronal buffer 1. This buffer (pH 8-6, 1=0-1), which was used for micro-electrophoresis, contained 0-1 M sodium veronal and 0-02M veronal.Veronal buffer 2. This buffer (pH 8 6, I =0-0375), which was used for continuous paper electrophoresis, contained 0-0375m sodium veronal and 0 0075m veronal. Phosphate buffer 1. This buffer (pH 74) was made by mixing 48 ml. of KH2PO4 (0-067m) and 202 ml. of Na2HPO4 (0.067m).Phosphate buffer 2. This buffer (I = 0-2, pH 7 45) contained 0-0142M-Na2HPO4, 0 0025M-KH2PO4 and 0 1M-NaCl. Sodium sulphate (27 %, w/v) in phosphate buffer pH 7-8. For this solution 270 g. of anhydrous Na2SO4, 6 g. of K2HPO4 and 0 488 g. of KH2PO4 were made up to 1 1. at 370* Dextran. Initially, a supply of 20 % Dextran was available, approximate molecular weight 40000 (kindly supplied by Dextran Co. Lt...

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“…) Electrophoretic analysis of serum. Serum was dialysed against veronal buffer 1 in micro-dialysis buckets, described by Geissen et al (1950), for 2 hr. and diluted to 1-2% protein with veronal buffer and analysed electrophoretically in the micro apparatus described above.…”

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confidence: 99%

A comparative study of cerebrospinal fluid and serum proteins in multiple sclerosis with special reference to the Lange colloidal-gold reaction

Press

1956

Biochemical Journal

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Graphische Registrierung und Auswertung von Serum‐Eiweiß‐Analysen

Schumacher

1954

Chemie Ingenieur Technik

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Die elektrophoretische Auftrennung von EiweiB-Losungen rnit der Mikromethode von Antweiler's) erfordert vie1 zeitraubende Schreib-und Rechenarbeit. Es wurde daher auf der Grundidee eines Vorschlages von D. Berg4) aufbauend ein Registrier-und ein Zeichengerat entwickelt. Diese gestatten bei hinreichender Genauigkeit eine Registrierung (Ablesung) und Auswertung (Differenzierung und Bestirnmung der Anteile) der MeOergebnisse auf graphischern Wege. Beschreibung und Methodik des Registriergerates Eine mit einem Gummiring versehene Metallscheibe a, Rild 1, ist axial fest mit der Skalentrommel verbunden. Sie treibt bei deren Drehung eine Leichtmetallwalze b, die mit einer zweiten Leichtmetallwalze c parallelachsig in einem Rahmen gelagert ist. Walze b bewegt ihrerseits eine Gummiwalze d, deren Lager federnd gegen Walze b gedriidct werden. Dadurch kann zwischen beiden ein 1 cm breiter einseitig gummierter Papierstreifen, iler in einer Nut der Walze c aufgespult ist, synchron mit der Skalentrommeldrehung bewegt werden. Die Walze c ist gefedert gelagert, damit der Papierstreifen immer unter leichter Spannung steht. Der bei Rechtsdrehung der Trommel (Ablesung) somit gleichmaDig nach vorn bewegte Streifen lauft uber eine Auflage e unter einer gefederten Drucktaste f durch, bei deren Betatigung der Papierstreifen mit einer feinen Stahlnadel gelocht wird. Bild 1. Registriergerat e Auflage, f gefederte Drucktaste a Metallscheibe, b , c Leichtmetallwalzen, d Gummiwalze,Die GroRe der Antriebsscheibe ist so gewahlt, daD die Abstande der Skalenstriche auf der Skalentrommel bei der Drehung etwa um das 1,3fache vergroDert auf den Papierstreifen iibertragen werden konnen. Bei der Messung einer in der Kuvette aufgetrennten EiweiD-Losung geht man folgendermaaen vor: Durch einen Hebelgriff wird die Gummiwalze hochgestellt, damit der Papierstreifen nicht bewegt wird, wahrend man das Interferenzspektrum im Okular einstellt und man sich durch Drehung des optischen Tisches a n die erste Fraktion herantastet. Wenn dies geschehen ist, wird die Gummiwalze wieder gesenkt, das erste Loch auf dem Streifen angebracht und der Stand der Skalentrommel im Protokoll vermerkt. Anstatt nun wie bisher beim Ausmessen der EiweiB-Saule die Skalenwerte abzulesen und zu notieren, wird der Papierstreifen gelocht. Damit sind die Skalenwert-Differen-Zen als Strecken auf dem Papierstreifen fixiert. Sollte an einer Stelle der Brechungsindex uber mehrere MeRpunkte gleich bleiben, wird die Anzahl dieser MeDpunkte festgestellt und bei der spateren Auswertung berudcsichtigt.Das gleiche gilt fur die Anzahl der MeRpunkte im Raum zwischen dem y-Globulin-Gradienten und der Kam-mergrenze als Startlinie. Beides ist fur die Fraktionsbestimmung auf Grund der zuruckgelegten Wanderungsstrecke s besonders wichtig. Am Ende der Messung wird wieder der Stand der Skalentrommel notiert.Der j e nach Protein-Gehalt der untersuchten Losung 20 bis 40 cm lange Registrierstreifen wird auf der gummierten Seite mit verdunnter Giemsa-Losung angefeudltet und auf ein kariertes Blatt Papier der G...

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