Efeito Da Rapamicina Sobre a Apoptose Em Cultura De Linfócitos Humanos Periféricos

Abstract

Objetivo: avaliar a indução de apoptose pela rapamicina em linfócitos humanos periféricos. Métodos: Polimorfos mononucleares foram separados do sangue periférico de voluntários sadios através de centrifugação em gradiente de densidade. A fração mononuclear foi suspensa em meio de cultura, e após, transferida para placas de cultura, às quais acrescentou-se fito-hemaglutinina (PHA) e/ou rapamicina conforme o ensaio. Foram testados quatro ensaios experimentais: cultura de linfócitos puros, linfócitos com PHA, linfócitos com rapamicina, e linfócitos com PHA e rapamicina. As culturas foram incubadas a 37°C em atmosfera estéril, com 5% de CO2 por 24 e 48 horas. A apoptose foi determinada através da marcação com Anexina V por citometria de fluxo. Resultados: não houve diferença estatisticamente significativa na detecção de apoptose em linfócitos com e sem rapamicina, tanto na análise após 24h (7,1% + 3,8 x 6,6% + 2,6, p=1,0) como após 48h ( 6,1% + 1,9 x 6,2 + 1,8, p=1,0 ). Já, linfócitos com PHA, na presença ou ausência da droga, aumentou estatisticamente a apoptose, tanto nas análises de 24h como nas de 48h ( P = 0,0000 e P = 0,0006, ANOVA). Nas culturas estimuladas com PHA a adição de rapamicina também não ocasionou aumento estatisticamente significativo nos percentuais de apoptose tanto em 24h (P=0,69) como após 48h (P>0,73). Conclusão: Os achados deste estudo mostram que a rapamicina não induz apoptose em cultura de linfócitos estimulada ou não.