Summary: A specific and sensitive method for quantification of the fructose-lysine linkages present in nonenzymatically glycosylated albumin and other proteins is described. Protein is hydrolyzed for 18 h in 6 mol/1 HC1 at 95 °C to yield furosine (e-N-(2-furoylmethyl)-I-lysine) known as a specific degradation product of fructose-lysine. Furosine is then separated on HPLC and quantified by its UV-absorbance against a prepared fructose-lysine standard. The method has been successfully used for the determination of glycosyl-albumin in diabetic patients starting from 100 serum or less, as well as for various other proteins. Unlike the usually employed thiobarbituric acid assay the present procedure is truly specific for the detection of ketoamine linkages of glycosylated proteins.
Spezifische Bestimmung von Protein (Lysin)-gebundener Glucose in Serumalbumin des Menschen und anderen glycosylierten Proteinen durch HochdruckflüssigchromatographieZusammenfassung: Es wird eine spezifische und empfindliche Methode zur Bestimmung der Fructose-Lysinbindungen von nichtenzymatisch glycosyliertem Albumin und anderen Proteinen beschrieben. Sie beruht auf der Hydrolyse des Proteins für 18 Stunden in 6 mol/1 HC1 bei 95 °C, wobei als spezifisches Abbauprodukt des Fructose-Lysins Furosin (e-N-(2-Furoylmethyl)-L-lysin) entsteht. Furosin wird dann durch HPLC abgetrennt und durch UV-Absorption gegen einen selbstsynthetisierten Fructose-Lysinstandard gemessen. Die Methode eignet sich fur die Bestimmung von glycosyliertem Albumin bei Diabetikern, ausgehend von 100 Serum und weniger, sowie auch allgemein für das Studium glycosylierter Proteine. Sie ist spezifischer als der häufig gebrauchte Thiobarbitursäure-Test, indem sie ausschließlich die Ketoaminbindungen glycosylierter Proteine erfaßt.