Die polarimetrische Messung der α-Amylase-Aktivität

Abstract

Zusammenfassung: Die relativ langsam ablaufende Hauptreaktion der amylasekatalysierten Hydrolyse von Oligosacchariden ist die Voraussetzung dafür, daß die Mutarotation als natürliche Folgereaktion keinen wesentlichen Einfluß auf die Kinetik der Gesamtreaktion besitzt. Für eine polarimetrische Aktivitätsbestimmung der -Amylase sind relativ große Probenmengen und lange Meßzeiten (Drehwinkeländerung pro Zeit) notwendig. Deshalb ist als Probenmaterial nur Urin und Duodenalsaft geeignet. Wegen der Unabhängigkeit von Folgereaktionen und Hüfsenzymen ist die polafimetrisch gemessene Kinetik der wahren Kinetik der Amylasereaktion generell näher als die mit vollenzymatischen Methoden gemessene und die polarimetrische Einzelbestimmung weniger anfällig gegen individuelle Störungen durch Prpbenbestandteile. Die dargestellten Ergebnisse polarimetrischer Untersuchungen zeigen bei Meßzeiten im Minutenbereich eine ausgezeichnete Linearität der Einzelkinetik, eine sehr gute Proportionalität zwischen Meßgröße und Enzymmenge und eine gute Präzision in der Serie (VK = 1,3%). Ein Vergleich der polarimetrischen mit einer chromogenen und einer voflenzymatischen Methode ergab brauchbare Korrelationen (r jeweils etwa 0,98). Die Vorund Nachteile der polarimetrischen Methode unter Einbeziehung möglicher Störfaktoren werden diskutiert. Polarimetric determination of a-amylase activitySuumary: In the study of the relatively slow amylase-catalysed hydrolysis of oligosaccharides, it is assumed that the subsequent mutarotation has essentially no effect on the kinetics of the total reaction. Relatively large samples and long measurement times (slow rate of change in angle of rotation) are necessary for the polarimetric determination of -amylase activity. For these reasons, only urine and duodenal juice are suitable as sample sources. Owing to the absence of coupled reactions and auxilliary enzymes, the polarimetrically determined kinetics are generally more representative of the true kinetics of the amylase reaction, than those obtained with fully enzymic methods; in addition, single determinations by the polarimetric method are less subject to interference by sample components. With measurement times in the order of minutes, the polarimetric method shows excellent linearity, very good proportionality between analytical response and quantity of enzyme, and good precision in series (CV = 1.3%). Comparison of the polarimetric with a chromogenic and a fully enzymic method showed an acceptable correlation (r for each method was about 0.98). The advantages and disadvantages of the polarimetric method, with consideration of possible interfering factors, are discussed. Einführungtion °^i ne störende Einflüsse erlaubt, ist andererseits ihr Meßsignal, die Drehwinkeländerung, kleiner als die AbNach einigen neueren Arbeiten (1-3) ermöglichen AktiSorptionsänderung der meisten photometrischen Methovitätsbestimmungen der -Amylase im Urin bei pankreas-^ j m folgenden sollen die wichtigsten Grundlagen bedingten und anderen gastrointestinalen

Determination of a-amylase activity using Fourier transform infrared spectroscopy

“…Then colorimetric assays with dye labeled insoluble polysaccharides were introduced [4]. Turbidometric [5], nephelometric [6] and polarimetric methods [7] all using high molecular weight substrates, have been described. In recent years methods using defined low molecular weight substrates and additional enzymes, trading increased cost for reagents have been proposed and are now frequently in use [8,9].…”