Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for carbaryl

Marco, M.‐Pilar; Gee, Shirley J.; Chen, Hong; Liang, Zeng Y.; Hammock, Bruce D.

doi:10.1021/jf00027a015

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“…Since organic solvents are commonly used in the sample preparation for nonpolar pesticides, it is desirable to assess the effects of organic cosolvents on ELISA characteristics. Since several workers reached the same conclusion that methanol causes the least negative effect of the solvents tested, [18][19][20] methanol was chosen as a cosolvent. Table 1 shows the effect of methanol concentration on ELISA performance.…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Organophosphorus Fungicide Tolclofos-methyl

2003

Bulletin of the Korean Chemical Society

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A simple synthetic method for haptens of organophosphorus (OP) pesticides with a spacer arm (aminocarboxylic acid) attached at the pesticide thiophosphate group was developed and was applied to the synthesis of haptens for the OP fungicide tolclofos-methyl. Using the haptens, a selective enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for tolclofos-methyl was developed. One of the haptens was coupled to BSA to use as an immunogen. Rabbits were immunized with this conjugate to obtain polyclonal antibodies to tolclofos-methyl. The antisera were screened against another hapten coupled to ovalbumin (OVA). Using the serum with highest specificity, an antigen-coated ELISA was developed, which showed an IC 50 of 160 ng/mL with the detection limit of 20 ng/mL. The antibodies showed negligible cross-reactivity with other OP pesticides. An antibody-coated ELISA was also developed, which showed an IC 50 of 410 ng/mL with a detection limit of 130 ng/mL.

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Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Organophosphorus Fungicide Tolclofos-methyl

2003

Bulletin of the Korean Chemical Society

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“…Con respecto al carbaryl, el primer IA descrito es de tipo ELISA y está basado en anticuerpos policlonales (Marco et al, 1993). El mismo grupo desarrolló un ELISA para la determinación de 1-naftol, el principal metabolito del carbaryl (Krämer et al, 1994).…”

Section: Aplicación De Los Inmunoensayos Al Análisis De N-metilcarbamunclassified

Desarrollo de un inmunoensayo multianalito, basado en anticuerpos monoclonales, para la determinación de plaguicidas N-metilcarbamatos en frutas y hortalizas.

Tamarit¹,

Ma²

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AGRADECIMIENTOSAl concluir este trabajo de investigación quiero dar las gracias a todas aquellas personas que de una forma u otra han colaborado en la realización de esta tesis.En primer lugar deseo mostrar mi agradecimiento a Ángel Montoya, responsable del Grupo de Inmunotecnología del Laboratorio Integrado de Bioingeniería y mi director de tesis. Siempre le estaré agradecida por la oportunidad que me dio y por estar cuando lo he necesitado. También quiero agradecer a Antonio Abad, codirector de tesis además de un excelente compañero de trabajo, la infinita paciencia y dedicación que ha tenido conmigo.Gracias a Rosa Puchades por tutelar este trabajo.A Juanjo, Carmen, Jovi, Tomás, Mª José y al resto de compañeros, que continúan o no realizando su trabajo en el LIB, por su ayuda y amistad.A Manuel Adelantado por su asistencia técnica en el análisis espectral.También quisiera mostrar mis más profundo agradecimiento a mi familia. A mis padres por su apoyo incondicional, aunque creo que no han acabado de entender para qué sirve todo esto, y a mis hermanos. Gracias a Salva por todo, por su ayuda y comprensión, por sus palabras de ánimo cuando las he necesitado, por ser como es. No quisiera olvidarme de María, mi mayor alegría y la causa por la que este trabajo estuvo un tiempo paralizado.Finalmente quisiera dejar constancia de que este trabajo ha sido realizado gracias a la concesión de una beca del Programa de Incentivo a la Investigación de la Universidad Politécnica de Valencia. PRESENTACIÓNEl uso de los plaguicidas es necesario para combatir las plagas que afectan a las cosechas y satisfacer de esta manera la gran demanda de los productos agroalimentarios en nuestra sociedad. Sin embargo, el empleo masivo de los plaguicidas está provocando una amplia distribución de sus residuos en el entorno natural causando graves problemas. Como consecuencia, surge la necesidad de supervisar las concentraciones de residuos en muestras agroalimentarias y medioambientales. Para llevar a cabo esta tarea, continuamente se están proponiendo métodos de análisis y, aunque los más habituales son las técnicas cromatográficas, en los últimos años los inmunoensayos se han revelado como métodos altamente eficaces para el análisis de un gran número de muestras debido a su sencillez, sensibilidad y especificidad.Una de las principales líneas de trabajo del Laboratorio Integrado de Bioingeniería (LIB) de la Universidad Politécnica de Valencia es, precisamente, el desarrollo de inmunoensayos tipo ELISA, basados en anticuerpos monoclonales, para el análisis de residuos de plaguicidas pertenecientes a distintas familias: organofosforados, organoclorados, N-metilcarbamatos y benzimidazoles. La especificidad inherente a los ELISAs, que puede resultar ventajosa en algunas ocasiones, dificulta sin embargo su aceptación como instrumento de análisis en los programas de control y seguimiento de residuos, en los cuales los métodos multirresiduo son los preferidos. Con el objetivo de promover una mayor aceptación de los inmunoensayos como métodos de rut...

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“…Se han descrito también métodos basados en la técnica ELISA e inmunosensores en flujo para la determinación de carbaril, utilizando tanto anticuerpos policlonales (46,165) como monoclonales (166)(167)(168)(169). Todos estos formatos de ensayo se caracterizan por su alta sensibilidad (I 50 < 0,1 µg/l) y baja reactividad cruzada con otros productos fitosanitarios de la misma familia.…”

Section: Estructura De Carbarilunclassified

“…En la Tabla 3.25 se muestran los valores de I 50 y reactividad cruzada (%RC) obtenidos en todos los ensayos realizados, incluyendo los obtenidos mediante la técnica ELISA (46). Estos ensayos se efectuaron, para cada inmunosoporte, en las condiciones óptimas previamente establecidas.…”

Section: Formato Directounclassified

“…Los haptenos H4 y CNH utilizados en este estudio fueron acoplados a AP mediante una modificación del método del éster activo (46). En todos los casos se utilizó el formato de captura de inmunocomplejo -dado que éste resultó ser el ensayo más sensible, como se ha demostrado anteriormente-, el tampón trizma base 0,05M, NaCl 0,138M y KCl 0,027M, pH 8 (tampón TBS) como medio de trabajo y el substrato enzimático luminiscente CDP Star (ver sección experimental) disuelto en tampón dietanolamina 0,1M, MgCl 2 1mM, ajustado a pH 9 con HCl concentrado (tampón de substrato, TS).…”

Section: Inmunosensores Basados En Detección Luminiscenteunclassified

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Inmunoensayos en medios orgánicos para el análisis en linea de plaguicidas

Villegas¹

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CERTIFICAN:Que las investigaciones recogidas en la presente memoria "Inmunoensayos en medios orgánicos para el análisis en línea de plaguicidas", que presenta D. José Penalva Villegas, Licenciado en Ciencias Químicas, han sido realizadas bajo nuestra dirección y cumplen con las normas en vigor en cuanto a calidad científica y volumen de trabajo. Por ello, autorizamos su presentación para ser defendida como Tesis Doctoral. Karl Gustav Jung Agradecimientos Agradecimientos Agradecimientos AgradecimientosEn el momento de escribir la Tesis Doctoral en la que se recogen los resultados obtenidos a lo largo de varios años, es imposible sustraerse a los recuerdos y personas que han influido enormemente en este periodo. Por tanto, me gustaría expresar mi más sincera gratitud a:Mis directores, Ángel Maquieira Catalá y Rosa Puchades Pla, quienes además de aceptar la dirección de esta Tesis, me han apoyado en todo momento.A todos mis compañeros y amigos: Miguel Ángel, Sergi, José Antonio, Paqui, Patricia, Lucía, Paloma, Fernando G., que han sabido crear un ambiente de trabajo muy agradable a lo largo de estos años.A

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Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for carbaryl

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Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Organophosphorus Fungicide Tolclofos-methyl

Desarrollo de un inmunoensayo multianalito, basado en anticuerpos monoclonales, para la determinación de plaguicidas N-metilcarbamatos en frutas y hortalizas.

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