Development of a Species-Specific Probe forPythium insidiosumand the Diagnosis of Pythiosis

Abstract

Pythium insidiosum, the only species in the genus that infects mammals, is the etiological agent of pythiosis, a granulomatous disease characterized by cutaneous and subcutaneous lesions and vascular diseases. Accurate diagnosis of pythiosis and identification of its causal agent are often inconsistent with current immunological diagnostic methods. A species-specific DNA probe was constructed by using a 530-bp HinfI fragment from the ribosomal DNA intergenic spacer of P. insidiosum. When the probe was incubated with dot blots of genomic DNA from 104 Pythium species, it hybridized only to the DNA of P. insidiosum and P. destruens-two species that have been considered conspecific. The probe also hybridized to DNA from 22 P. insidiosum isolates in this study, regardless of their geographic origin or animal host. When tested against genomic DNA from other pathogenic organisms (Aspergillus fumigatus, Basidiobolus ranarum, Conidiobolus coronatus, Lagenidium giganteum, Paracoccidioides brasiliensis, and Prototheca wickerhamii), no cross-hybridization of the probe was detected. The specificity of the probe to hybridize to genomic DNA from all isolates of P. insidiosum and not cross-react with DNA from other Pythium species or pathogens that cause symptoms similar to pythiosis in their hosts makes it a powerful tool for the accurate diagnosis of pythiosis. In addition, the probe has the potential for pathological and environmental diagnostic applications.

Utilização da técnica de imuno-histoquímica para confirmar casos de pitiose cutânea equina diagnosticados por meio de caracterização clínica e avaliação histopatológica

“…Atualmente, métodos como a imunohistoquímica (Brown et al, 1988), imunodifusão (Miller e Campbell, 1982;Kaufman et al, 1990), ensaio imunoenzimático ELISA (Mendoza et al, 1997;Santurio et al, 2006b) e, mais recentemente, os métodos moleculares (Grooters e Gee, 2002; Schurko et al, 2004;Vanittanakom et al, 2004) auxiliam e suportam o diagnóstico precoce e correto dessa afecção (Mendoza et al, 1996). Em 1988, Brown et al descreveram pela primeira vez o método de imuno-histoquímica para diagnóstico de pitiose equina, que foi posteriormente utilizado por vários autores (Fischer et al, 1994;Purcell et al, 1994).…”

Micosis por Pythium Insidiosum primer caso con diagnóstico definitivo en Colombia

“…Es considerada una micosis emergente (14). La adquisición de Pitiosis se hace vía zoosporas flageladas motiles en ambientes acuáticos y cenagosos empantanados, en regiones de clima tropical y subtropical (2,14,22).…”

“…Las zoosporas de P. insidiosum ingresan por lesiones de piel o ingestión (22). En piel intacta, se demuestra, entran por el folículo piloso en equinos y bovinos (15,23); en contacto con tejidos las zoosporas pierden sus flagelos e inician la formación "hifas" en dirección tisular penetrando mecánicamente con la ayuda de enzimas proteolíticas (4,24,25).…”

Teste de ELISA indireto para o diagnóstico sorológico de pitiose

“…Entretanto, por esses métodos o diagnóstico precoce é difícil e requer diferenciação de outras lesões granulomatosas e/ou identificação microbiológica do agente, muitas vezes complicada pelas contaminações secundárias (Chaffin et al 1992, Leal et al 2001a. Métodos como imunohistoquímica (Brown et al 1988), imunodifusão (Miller & Campbell 1982, Kaufman et al 1990), ensaio imunoenzimático ELISA (Mendoza et al 1997) e, mais recentemente, os métodos moleculares (Grooters & Gee 2002, Schurko et al 2004, Vanittanakom et al 2004) tem sido empregados no diagnóstico de pitiose. A técnica de ELISA, primeiramente descrita por Mendoza et al (1997), tem sido empregada como um método seguro e eficaz para o diagnóstico precoce em humanos e animais (Santurio et al 2001, Vanittanakom et al 2004.…”