Detection and enumeration of Erwinia carotovora subsp. atroseptica using spiral plating and immunofluorescence colony staining

Abstract

Immunofluorescence colony staining (IFC) and a new technique using spiral plating combined with IFC were evaluated for the soft-rot pathogen Erwinia carotovora subsp. atroseptica in witloof chicory. Target bacteria could be detected in platings at various dilutions of plant washings. Brilliance of the stained colonies of E. carotovora subsp. atroseptica was high. Spiral plating, used for both the plating of the bacteria and for the delivery of the conjugated antiserum, had a positive effect on the reduction of the background compared with the staining of the bacteria. The combination of spiral plating and IFC proved to be a functional tool for the quantification of target and nontarget bacteria and the isolation of target bacteria as pure culture from IFC-positive colonies. The method uses less conjugated antiserum than traditional IFC and produces results with very small variation within replications. The recovery of the bacteria in both pure culture and plant washing is significantly higher than the recovery using crystal violet pectate medium. RCsumC : Pour fin de diagnostic, la coloration de colonies par immunofluorescence (IFC), ainsi qu'une nouvelle technique utilisant 1'Ctalement en spirale combink i I'IFC, ont Ct C CvaluCes sur Erwinia carotovora subsp. atroseptica, l'agent pathoghe de la pourriture molle chez l'endive. Les batteries cibles ont pu Ctre dCtectCes sur plaques B diverses dilutions des lavages des plantes. La luminescence des colonies colortes d'E. carotovora subsp. atroseptica Ctait forte. L'Ctalement en spirale utilisC tant pour les bactCries que pour l'addition de I'antisCrum conjuguC a eu pour effet de reduire le rayonnement de fond comparativement B la coloration des bactkries. La combinaison de la culture en spirale et de I'IFC s'est rCvC1Ce un outil fonctionnel pour la numCration des bactCries cibles et non cibles et pour l'isolement des bactkries cibles en culture pure B partir des colonies IFC positives. La mCthode requiert moins d'antiskrum conjuguC que I'IFC traditionnelle et produit des rCsultats avec des variations minimes entre les repiquages. Le recouvrement des bactCries dans les cultures pures et dans les lavages de plantes est significativement plus tlevt que le recouvrement sur milieu de pectate avec cristal violet.