CONVENIENT METHOD FOR RAPID AND QUANTITATIVE ASSESSMENT OF SALMONELLA ENTERICA CONTAMINATION: THE MINI‐MSRV MPN TECHNIQUE

Abstract

Direct assessment of Salmonella numeration is still a challenge in cases of numerous number of low Salmonella/competitive flora ratio samples. Nowadays the usable methods provide data with such large confident intervals that the obtained results do not justify the labor and time spent. So we developed a method based on miniaturization of the dilution, preenrichment and selective enrichment on MSRV steps and on automation as the transfers are performed with multichannel pipettes. This so called mini‐MSRV method provides a rapid and convenient way to assess the quantification Salmonella in studies providing many samples. After description of the method, this paper presents the results obtained from 3 different types of samples issued from 3 different steps of the production chain where quantitative assessment of the Salmonella risk may be useful.

Enumeration of Salmonella Bacteria in Food and Feed Samples by Real-Time PCR for Quantitative Microbial Risk Assessment

“…The document comprises enumeration of Salmonella by the MPN technique. An MPN protocol has been developed, as described by Fravalo et al (15), and it will be validated. This protocol is based on miniaturization of the dilution, preenrichment, and selective enrichment steps in 12-well microwell plates.…”

No Protective Effects of High-Dosage Dietary Zinc Oxide on Weaned Pigs Infected with Salmonella enterica Serovar Typhimurium DT104

“…S. Typhimurium was quantified in all samples by plating 400 l of filtrates using a spiral plater. In addition, for all samples, a mini-most probable number (mini-MPN) method was applied in triplicate to reduce the detection limit of salmonellae and to obtain more accurate CFU numbers (20). Fivefold dilutions in BPW-NAL were performed in two 24-well culture plates.…”

Número mais provável miniaturizado e microbiologia convencional para isolamento de Salmonella spp. em abatedouros de frangos de corte

“…Fravalo et al (2003) propuseram uma metodologia de mNMP utilizando o MSRV para seleção de salmonelas móveis e posterior desenvolvimento em meios cromogênicos enquanto Pavic et al Os resultados do presente trabalho, que utilizou a metodologia de Fravalo et al (2003) adaptada por Colla et al (2014), podem ser inicialmente atribuídos a heterogeneidade das amostras, em concordância com Skjerve & Olsvik (1991), ao citar que a matriz afeta a sensibilidade e a especificidade de um protocolo de isolamento e representaria ambientes críticos avícolas, que variam de amostras com baixa umidade e altamente úmidas (carcaças e água do tanque da escaldagem) até ambientes altamente competitivos (cecos e fezes) (USDA-FSIS 2008). Também o limite de detecção do mNMP (0,13 NMP/mL, dados não mostrados) ou os volumes diminutos utilizados no pré-enriquecimento e enriquecimento seletivo, em comparação com a microbiologia convencional, podem ter influenciado negativamente o isolamento e quantificação das amostras.…”

“…nas amostras naturalmente contaminadas foi utilizado o método do mNMP proposto por Fravalo et al (2003) e adaptado por Colla et al (2014), que contém as mesmas fases da microbiologia convencional mas executadas em placas de 24 poços com capacidade para 2,5mL. Previamente ao experimento foram realizados ensaios para determinar o limite de detecção do mNMP em amostras de carne de frango artificialmente contaminadas com Salmonella Enteritidis ATCC 13076, que apontaram um limite de 0,13 NMP/mL.…”