Conjugação e validação de controle isotípico IgG1-FITC para uso em citometria de fluxo

Golim, Márjorie de Assis; Deffune, Elenice; Rossi-Ferreira, Rosana; Oliveira, Ana Paula Ehrhardt de; Padovani, Carlos Roberto; Machado, Paulo Eduardo de Abreu

doi:10.1590/s1516-84842007000400008

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“…FITC é o marcador fluorescente mais comumente usado para conjugar proteínas via grupo amina. Ele reage com grupos de proteínas com terminal amino ou aminas primárias (GOLIM et al, 2007), sendo assim este pode ser conjugado a faloidinas. Faloidinas pertencem a dois grupos de pequenas moléculas orgânicas que se ligam a actina e alteram sua polimerização naturalmente.…”

Section: Testes Utilizados Para Verificar a Formação De Biofilmeunclassified

Formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica atípica.

Culler¹

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Formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica atípica.

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Flow cytometry: a literature review

Errante

Ebbing

Rodrigues

et al. 2016

cmbio

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ResumoIntrodução: a citometria de fluxo é uma técnica que utiliza um aparelho de detecção óptico-eletrônico para analisar as propriedades físicas e químicas das partículas microscópicas suspensas em meio líquido. Objetivo: revisar a literatura em busca dos principais estudos que utilizaram a citometria de fluxo como a metodologia principal. Método: os artigos foram selecionados de acordo com seu fator de impacto no Journal of Citation Reports. Revisão da literatura: um feixe de luz é dirigido para um fluxo contínuo de partículas suspensas marcadas com substâncias fluorescentes. A luz é difundida de forma diferente a partir do feixe de partículas e é capturada por meio de sensores em linha e perpendiculares ao feixe de luz. Tais partículas microscópicas são conjugadas com substâncias fluorescentes que emitem luz de frequência mais baixa do que a fonte de luz. A luz emitida é capturada por meio de sensores e as partículas são analisadas de acordo com flutuações de brilho de cada um dos detectores e/ou de emissão de fluorescência. O resultado deste processo é a formação de imagens em tempo real para cada célula da fluorescência, dispersão e transmissão de luz. Um dos principais problemas de citometria de fluxo é determinar se um subconjunto de células marcadas com anticorpos monoclonais conjugados com fluorocromos é positivo ou negativo. Ganhos de compensação devem ser determinados e aplicados corretamente, e os controles devem ser realizados de forma concisa, com a adoção de um controle biológico, controle de isotipo ou fluorescência menos uma (FMO). Nenhum desses controles é considerado ideal, e deve ser escolhido de acordo com o número de rotulagem, paucidade da expressão de moléculas na superfície ou no meio intracelular em determinadas subpopulações de células, sobreposição de comprimentos de onda ou ligação inespecífica dos anticorpos conjugados com fluorocromo. Conclusão: devido ao seu grande potencial, o uso da citometria de fluxo foi expandido para diversos campos das ciências biológicas, e é utilizada rotineiramente em clínicas de diagnóstico, e laboratórios de pesquisa básica e aplicada. Palavras-chave: Citometria de fluxo. Anticorpos monoclonais. Fluorocromos.

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Formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica atípica.

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