Comparación de métodos de lisis y extracción de ADN de trofozoítos de Giardia lamblia

Molina, Nora Beatriz; Polverino, Daniela; Minvielle, Marta Cecilia; Apezteguía, María; Aguilar, Mario; Basualdo, Juan Ángel

doi:10.4067/s0717-77122006000200006

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“…al usar el marcador bg (100% de amplificación) y con gdh (60%), en comparación a los otros métodos evaluados; cabe resaltar que esta combinación se basó en los métodos de Adamska (19) , Rojas (20) , Babaei (21) y Molina (24) . Con respecto a la evaluación de métodos de extracción de trofozoítos indicamos que al someter a las muestras a pretratamientos (Métodos II-VI) no se logró mejorar la extracción de ADN somático del parásito, más bien se tuvo baja recuperación, contrario a lo reportado por Molina et al (7) , cabe resaltar que en todos los casos la calidad de ADN fue óptima, motivo por el que no se sugiere realizar pretratamientos para este estadio evolutivo de Giardia spp. ya que reduce significativamente la extracción de ADN parasitario.…”

Section: Discussionunclassified

“…Los cebadores del PCR 1 fueron el primer forward G7: AAG CCC GAC GAC CTC ACC CGC AGT GC y el primer reverse G759: GAG GCC GCC CTG GAT CTT CGA GAC GAC y el forward para el PCR 2 fue el G376: GAT AAC GAC GCC ATC GCG GCT CTC AGG AA. Método II (7,23) Pretratamiento enzimático 8: Incubar con el búfer de lisis E (Tris-HCl 100 Mm, EDTA 100 mM, SDS 2%, NaCl 0,2 M, mercaptoetanol 1 mM, proteinasa K (100µg/mL). Extracción: Kit comercial PureLink Genomic DNA de Invitrogen.…”

Section: Amplificación Del Pcr Semianidadaunclassified

“…Método IV (7) Pretratamiento enzimático 10: Incubar con el búfer de lisis E (Tris-HCl 100 Mm, EDTA 100 mM, SDS 2%, NaCl 0,2M, mercaptoetanol 1 mM, proteinasa K (20 mg/mL). Extracción: Kit comercial PureLink Genomic DNA de Invitrogen.…”

Section: Amplificación Del Pcr Semianidadaunclassified

“…Método V (7) Pretratamiento Tabla 4. Comparaciones múltiples de acuerdo a la concentración y calidad de ADN generados por los diferentes métodos de extracción de ADN de Giardia spp.…”

Section: Amplificación Del Pcr Semianidadaunclassified

“…Los métodos de extracción tradicionales in house utilizan solventes orgánicos para separar a las proteínas y lípidos del ADN a fin de aislarlo por precipitación con etanol. Estos métodos requieren preparar soluciones y la extracción puede durar varias horas (7) . Los métodos comerciales son más rápidos (8) , están basados en membrana de sílica, facilitando con ello la adsorción de la molécula de ADN a la membrana cargada positivamente para lograr el aislamiento de ADN integro con calidad y cantidad adecuadas, libre de contaminantes e inhibidores (9) ; garantizando el diagnóstico molecular, disminuyendo falsos negativos, y mejorando su sensibilidad.…”

Section: Introductionunclassified

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Comparación de métodos de extracción de ADN de Giardia spp. medidos por PCR convencional

Terrones

Silva-Molina

Beltrán-Fabián

et al. 2019

Rev Peru Med Exp Salud Publica

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Objetivos. Comparar diferentes métodos de extracción de ADN a partir de quistes y trofozoítos de Giardia spp. mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional. Materiales y métodos. Se aislaron quistes de Giardia spp. a partir de 65 muestras coprológicas procedentes de hospitales de referencia nacional, obteniéndose una carga promedio de 5x10 4 parásitos. Asimismo, se cultivaron trofozoítos de Giardia intestinalis (ATCC® 30957™) obteniéndose una carga parasitaria de 5x10 6. Se compararon once métodos de extracción para quistes y seis para trofozoítos. La concentración y pureza del ADN extraído se determinó por espectrofotometría y el rendimiento de la extracción se evaluó mediante la amplificación de los genes beta giardina (bg) y glutamato deshidrogenasa (gdh) por PCR semi-anidada. Resultados. Se observó que el método I mostró la mayor concentración de ADN a partir de quistes (12,24 ng/µL), pureza (1,4) y mejor rendimiento (100% amplificación bg, 60% gdh) en comparación con los otros métodos evaluados. En el caso de los trofozoítos el método que no tuvo pretratamientos presentó la mayor concentración de ADN, pureza y rendimiento (26,56 ng/µL; 1,85; 100% amplificación bg y gdh). Conclusiones. Los pretratamientos mecánicos, de choque térmico y enzimáticos son necesarios para la ruptura de la pared quística de Giardia spp., siendo el marcador molecular bg de mayor rendimiento para detección de ADN de quistes. Los trofozoítos no requieren pretratamientos para lograr resultados satisfactorios. Se cuenta con una metodología reproducible para la extracción de ADN de Giardia spp. a partir de cualquier estadio evolutivo.

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Section: Discussionunclassified

Section: Amplificación Del Pcr Semianidadaunclassified

“…Método V (7) Pretratamiento Tabla 4. Comparaciones múltiples de acuerdo a la concentración y calidad de ADN generados por los diferentes métodos de extracción de ADN de Giardia spp.…”

Section: Amplificación Del Pcr Semianidadaunclassified

Section: Introductionunclassified

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Comparación de métodos de extracción de ADN de Giardia spp. medidos por PCR convencional

Terrones

Silva-Molina

Beltrán-Fabián

et al. 2019

Rev Peru Med Exp Salud Publica

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COMPARACIÓN DE MÉTODOS CONVENCIONALES Y MOLECULARES PARA LA DETECCIÓN DE Giardia lamblia EN HECES HUMANAS

Cardona¹,

Castañeda²,

Álvarez³

et al. 2014

luaz

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Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in Free-Ranging Introduced Monk Parakeets from Santiago, Chile

Sandoval-Rodríguez

Marcone

Alegría-Morán

et al. 2021

Animals

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Monk Parakeets (Myiopsitta monachus) are medium-sized parrots that due to international pet trade currently exist as invasive species in 19 countries globally. Such is the case of Chile, where Monk Parakeets have thrived in the city of Santiago. Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are worldwide distributed gastrointestinal parasites whose potential hosts include birds and humans. The present study sought to determine the presence of these pathogens in Monk Parakeets from Santiago. During the austral summers of 2017 and 2018, 207 Monk Parakeet nestlings were captured, and fecal samples were studied via microscopical analyses. Environmental data related to the trees in which the nestlings were captured were analyzed to establish the existence of infection clusters. Associations between spatial clusters, environmental variables, and the presence or absence of these pathogens were explored. In total, 33 samples were positive to the presence of one or both protozoa. Of the 33, Cryptosporidium spp. oocysts were detected in 10 nestlings (30%) while Giardia spp. cysts were detected in 25 (76%). Two nestlings presented poly-parasitism (6%). Statistical analyses established pruned trees as a potential protective factor against infection with these parasites. The present study corresponds to the second report of Cryptosporidium spp. in Monk Parakeets in Chile and the first worldwide report of Giardia spp. in these birds, emphasizing Monk Parakeet’s potential role as a reservoir and pathogen disseminator, especially in urban environments.

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Comparación de métodos de lisis y extracción de ADN de trofozoítos de Giardia lamblia

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Comparación de métodos de extracción de ADN de Giardia spp. medidos por PCR convencional

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Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in Free-Ranging Introduced Monk Parakeets from Santiago, Chile

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