Combined monoclonal antibody typing, multilocus enzyme electrophoresis, soluble protein profiles and plasmid analysis of clinical and environmental Legionella pneumophila serogroup 1 isolated in a Portuguese hospital

Consensus Sequence-Based Scheme for Epidemiological Typing of Clinical and Environmental Isolates ofLegionella pneumophila

“…Many phenotypic and genotypic methods have been applied to the epidemiological typing of Legionella pneumophila (4,12,15,21,23,28,29,(34)(35)(36), the principal cause of the majority of cases of legionellosis (22). Members of The European Working Group for Legionella Infections (EWGLI) have previously evaluated a number of genotypic methods for the epidemiological typing of L. pneumophila, which is particularly applicable to cases of travel-associated legionellosis.…”

Μοριακή τυποποίηση στελεχών legionella pneumophila ορολογικής ομάδας 1 και συσχέτιση της μοριακής δομής των στελεχών με τη λοιμογόνο δύναμη τους

“…Οι πηκτές υπόκεινται σε ειδικές χρώσεις για τα μεταβολικά ένζυμα που επιλέγονται για μελέτη (εστεράσες 2, 3, 5, και 6, ισοκιτρική αφυδρογονάση, μηλική αφυδρογονάση, αφυδρογονάση αλανίνης, πεπτιδάση κ.α.) (326). Μετά τις χρώσεις προκύπτουν ποικιλίες ηλεκτροφορητικών τύπων με βάση την κινητικότητα των διαφόρων ενζύμων, την απουσία ή παρουσία των ενζύμων από κάποια στελέχη, καθώς και το συνδυασμό των αλληλομόρφων γονιδίων για τα υπό μελέτη ένζυμα.…”

“…Μετά τις χρώσεις προκύπτουν ποικιλίες ηλεκτροφορητικών τύπων με βάση την κινητικότητα των διαφόρων ενζύμων, την απουσία ή παρουσία των ενζύμων από κάποια στελέχη, καθώς και το συνδυασμό των αλληλομόρφων γονιδίων για τα υπό μελέτη ένζυμα. Η τεχνική αυτή αποδείχθηκε αρκετά ικανή να διακρίνει στελέχη μεταξύ τους, γι' αυτό και πολλοί ερευνητές την εφάρμοσαν στη διερεύνηση επιδημιών που προκλήθηκαν από τη L. pneumophila και άλλα είδη Legionella (317,(326)(327)(328).…”

“…Παρά το γεγονός ότι αυτή η μέθοδος μπορεί να δώσει αξιόπιστα δεδομένα για την τυποποίηση στο επίπεδο του είδους, βασικό της μειονέκτημα είναι η πτωχή προσέγγιση στο επίπεδο στελέχους, εφόσον τα πρωτεϊνικά πρότυπα στελεχών της ίδιας ή διαφορετικών ορολογικών ομάδων ελάχιστα διαφέρουν. Επιπρόσθετα είναι μια μέθοδος εξαιρετικά επίπονη και απαιτητική (υπερφυγοκεντρήσεις, ειδικές κατεργασίες αδρανοποίησης, πολύπλοκο πρωτόκολλο απομόνωσης πρωτεϊνών) και όχι ιδιαίτερα σταθερή, εφόσον τα αποτελέσματα σαφώς επηρεάζονται από τη μέθοδο που χρησιμοποιείται για αδρανοποίηση των βακτηρίων, καθώς και από την παρουσία ή μη 2μερκαπτοαιθανόλης στο διάλυμα φόρτωσης (326,333,335).…”

“…Οι φαινοτυπικές μέθοδοι τυποποίησης (τυποποίηση με μονοκλωνικά αντισώματα, ηλεκτροφόρηση μεταβολικών ενζύμων, κ.α.) εφαρμόσθηκαν στο παρελθόν από πολλούς ερευνητές και προσέφεραν χρήσιμες πληροφορίες στην επιδημιολογία των Λεγεωνελλών, καθώς έχουν βελτιώσει σημαντικά την κατανόηση της πορείας των λοιμώξεων που προκαλούνται από αυτές (318)(319)(320)(321)(322)(323)(324)(325)(326)(331)(332)(333)(334)(335). Ωστόσο, η πλειονότητα των φαινοτυπικών μεθόδων στηρίζεται στην ποικιλότητα έκφρασης αντιγονικών, μεταβολικών, ή άλλων φαινοτυπικών καθοριστών και η εφαρμογή τους περιορίζεται σε ορισμένο αριθμό ειδών.…”