Caracterização e identificação molecular de espécies de Colletotrichum associadas à antracnose da goiaba no Estado de São Paulo

Abstract

Characterization and molecular identification of Colletotrichum species associated with guava anthracnose in São Paulo State Anthracnose is one of the major diseases affecting guava in the State of São Paulo. Both Colletotrichum gloeosporioides and Colletotrichum acutatum are reported as the causal agents of the disease. The objectives of this work were to characterize and to identify 54 Colletotrichum isolates from guava, based on cultural, morphological, molecular, enzymatic, and pathogenic aspects. Cultural characterization was achieved by measuring the mycelial growth at 25 ° C, as well as reporting cultural aspects, such as color and topography of the colonies. In the morphological characterization it was measured length and width of conidia, and rated their shapes. CaInt2 and CgInt specific primers were used in the molecular identification of the Colletotrichum isolates. The enzymatic characterization was performed by measuring, in vitro degradation of starch, protein, cellulose, pectin and lipid. Finally some representative and identified isolates were used in the pathogenic characterization, evaluated by latency and incubation periods, diseased area and sporulation. Based on the color of the colonies, the isolates were grouped in 9 different groups. These same isolates showed two distinct growth paterns according to the mycelial growth rates. Conidia showed shapes: (i) straight, fusiform, with acute ends, (ii) straight, oblong, with round ends, (iii) straight, clavate, tapered at one end and (iv) straight, with a constriction in the middle. Conidia size ranged from 11.4 to 16.8 µm in length by 2.6 to 4.9 µm in width. The use of specific primers identified C. acutatum and C. gloeosporioides among the isolates. Most of the isolates (94%) were identified as C. gloeosporioides, while only (6%) were identified as C. acutatum. In the enzymatic characterization, only cellulolytic activity revealed significant differences between C. gloeosporioides and C. acutatum. Pathogenicity of the isolates was highly variable, but could not help to distinguish between C. acutatum and C. gloeosporioides. The incubation and latency periods were shorter for C. acutatum in relation to C. gloeosporioides. C. acutatum produced higher amounts of spores on inoculated fruits compared to C. gloeosporioides. There was also a positive correlation between in vitro degradation of pectin, lipid and starch, and the diseased area for tested isolates.

Cylindrocladium spathiphylli de espatifilo (Spathiphyllum wallisii Rengel): detecção de enzimas extracelulares em isolados normais e alterados por temperatura

“…Adicionaram-se 5 mL de solução de lugol, por 10 minutos, em cada placa, após manter as mesmas em BOD, a 23°C, por 5 dias, no escuro, para verificar a atividade amilolítica. Resultado positivo refere-se a um halo amarelado ao redor da colônia em contraste com um fundo roxo (34).…”

Antracnose do abacateiro: danos pós-colheita, caracterização do agente causal, quantificação de parâmetros da pré-penetração e monocíclicos e controle químico

“…O isolamento foi realizado pela coleta de esporos presentes em uma única lesão, com uma agulha histológica esterilizada e transferência dos mesmos para meio batata-dextrose-ágar (BDA) Acumedia ® (39g/L). As culturas monospóricas foram obtidas conforme descrito por Pereira (2009).…”

“…Os isolados foram cultivados em meio contendo 20 g de ágar acrescido de 0,5% (p/v) de ácido gálico, 15 g extrato de malte e 1 g de peptona em 1 L de água destilada (pH 7,0 (TOZZE JÚNIOR, 2007;ANDRADE et al, 2007;PEREIRA, 2009;PIMENTA, 2009), demonstrando que a variação intraespecífica da cor do reverso da colônia é maior do que Sutton (1992) AV-01 6,4 a 1 8,5 b 9,4 h 9,1 e 5,7 e Branca acinzentada / castanho - PS-63 3,8 h 4,9 j 6,9 l 5,4 n 2,8 i Branca acinzentada / salmão -PS-64 4,3 f 6,6 g 11,0 e 7,6 h 2,7 i Branca acinzentada / salmão - Tabela 4 -Características culturais de isolados de Colletotrichum spp. de abacate, manga, maracujá e pêssego: Taxa de crescimento de colônias cultivadas em meio batata-dextrose-ágar sob fotoperíodo de 12 horas em diferentes temperaturas, cor predominante da colônia e presença de massas de conídios (conclusão)…”

“…Quanto às relações entre o comprimento e a largura dos conídios, constataram-se valores entre 3,3 e 4,3 para isolados de abacate, 3,2 e 4,7 para os isolados de manga e de 2,9 a 3,7 para os isolados de maracujá (VERAS, GASPAROTTO, MENEZES, 1997;FURTADO et al, 1999;PEREIRA;.…”

“…Entretanto, as dimensões médias dos conídios, em geral, não permitiram uma clara classificação dos isolados. Assim como foi verificado neste trabalho, as dimensões dos conídios também não contribuíram de maneira consistente para a identificação de isolados de Colletotrichum nos trabalho desenvolvidos porAndrade et al (2007) ePereira (2009), pois a maioria dos isolados estudados por esses autores apresentaram dimensões dentro da faixa em que há sobreposição para as espécies C. gloeosporioides e C. acutatum.A ocorrência de isolados com formato de conídios similar ao que é descrito para uma determinada espécie mas com dimensões fora da faixa descrita para a mesma, pode ter sido resultante de variações fenotípicas, comuns para fungos do gênero Colletotrichum Colletotrichum variou em função do substrato utilizado para a produção dos mesmos. Resultados similares foram obtidos por e Bueno, TozzeJúnior e Massola Júnior (2005), que estudando a variabilidade morfológica de conídios de C. acutatum e C. gloeosporioides demonstraram haver diferenças significativas nas dimensões e formato de conídios produzidos por um mesmo isolado em função das condições de cultivo, como substrato, temperatura e fonte de luz.…”