Biểu Hiện Và Đánh Giá Hoạt Tính Kháng Nguyên Của Protein Tes-30 Tái Tổ Hợp Bằng Western Blot

Abstract

Bệnh giun đũa chó mèo là một bệnh có biểu hiện lâm sàng không đặc hiệu, đặc trưngbởi sự di chuyển của ấu trùng đến các cơ quan nội tạng của người và một số động vật. Dobiểu hiện triệu chứng nhiễm ký sinh trùng trên lâm sàng rất nghèo nàn, chính vì vậy phươngpháp miễn dịch ELISA được sử dụng để phát hiện kháng thể IgG trong huyết thanh ngườibệnh kháng lại kháng nguyên chất tiết của Toxocara spp. (TES - Toxocara spp. excretorysecretory antigens). Quy trình thu nhận kháng nguyên TES tự nhiên bằng phương pháp nuôicấy ấu trùng giun đũa chó mèo, đòi hỏi kỹ thuật đặc thù, hiệu suất thu nhận kháng nguyênTES thấp và tốn thời gian. Đây chính là các hạn chế chủ yếu của quy trình chế tạo khángnguyên TES thông thường, ngoài ra kháng nguyên có khả năng phản ứng chéo với kháng thểkháng các loại giun khác, gây hiện tượng dương tính giả. Trong nghiên cứu này, một trình tựcDNA tổng hợp nhân tạo bằng phương pháp hóa học mã hóa kháng nguyên TES-30 được đưavào vectơ pET-52b (+) và được biểu hiện trong E. coli BL21 (DE3) ở dạng dung hợp đuôi áilực (His)10. Tiến hành tinh sạch bằng sắc ký ái lực và điện di SDS-PAGE thu được protein táitổ hợp TES-30 có kích thước 30 kDa. Kết quả Western blot xác nhận protein TES-30 tái tổhợp có hoạt tính kháng nguyên kháng lại kháng thể IgG lưu hành trong máu người nhiễm ấutrùng Toxocara spp. Biểu hiện thành công protein tái tổ hợp TES-30 cung cấp nguồn nguyênliệu cho phát triển các kit xét nghiệm chẩn đoán bệnh giun đũa chó mèo ở Việt Nam