Atypical Changes of Deoxyribonucleoprotein During Spermiogenesis Associated With a Case of Infertility in the Bull

Gledhill, Barton L.; Gledhill, M.P.; Rigler, Rudolf; Ringertz, Nils R.

doi:10.1530/jrf.0.0120575

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“…These methods are based on the ability of some stains to test the conformation of sperm chromatin, which in turn depends on DNA strand breaks and DNA interaction with proteins (8, 9). The idea to test sperm chromatin with acridine orange (AO) after DNA denaturation occurred in the 1960s (10–12). In conjunction with flow cytometry, this method is known as sperm chromatin structure assay (SCSA) (13).…”

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confidence: 99%

Toluidine blue test for sperm DNA integrity and elaboration of image cytometry algorithm

et al. 2003

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Background Sperm DNA integrity is of paramount importance in the prognosis of fertility. We applied image cytometry to a toluidine blue (TB) test we recently proposed. Methods Sperm samples from 33 men were assayed for standard sperm parameters and classified as normal or abnormal. Sperm smears were subjected to the TB test, DNA denaturation testing with acridine orange (AO), and terminal deoxyuridine triphosphate biotin nick end labeling (TUNEL). In CCD image analysis, TB‐stained sperm cell heads were microscopically assigned to one of four color groups (dark, blue, light violet, and light blue). The optical densities of 6,600 cells in green and red CCD images were used to elaborate an algorithm for discrimination of these groups. Results The proportions of sperm in TB color groups, as estimated with the developed image cytometry algorithm, correlated with microscopic features. The number of TB dark cells correlated with the number of AO‐red and TUNEL+ cells. The proportion of TB dark cells in normal samples did not exceed 35%. Light‐blue sperm cell heads prevailed in normal samples, whereas dark and blue sperm cell heads dominated in abnormal samples. Conclusions The TB test was suitable for the assessment of sperm cell DNA integrity. The elaborated image cytometry algorithm can be used for this purpose and for finer determination of sperm nucleus status. Cytometry Part A 52A:19–27, 2003. © 2003 Wiley‐Liss, Inc.

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confidence: 99%

Toluidine blue test for sperm DNA integrity and elaboration of image cytometry algorithm

et al. 2003

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“…Defects in the binding of nuclear protein to DNA, which probably occur during the process of chromatin aggregation in spermateliosis, have only recently been incriminated in the formation of certain misshapen sperm heads (Gledhill, Dar\l=z%o\ynkiewicz & Ringertz, 1971). Their possible r\l=o^\lein an instance of infertility was noted earlier (Gledhill, Gledhill, Rigler & Ringertz, 1966a).…”

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confidence: 55%

Further Studies on the Nuclear Chromatin of Morphologically Abnormal Bull Spermatozoa

Gledhill¹

1972

Reproduction

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In ejaculated semen from highly fertile bulls, abnormal head forms constitute 5 to 20% of the total number of sperm heads, while even higher percentages are commonly found in ejaculates from bulls with certain types of reduced fertility. Intranuclear spaces and a granular appearance of the nuclear chromatin were the major abnormalities observed in a high percentage of spermatozoa from two infertile bulls (McCosker, 1969). The organization of the DNA and nuclear proteins forming the deoxyribonucleoprotein complex (DNP) in the chromatin of deformed sperm heads has received little attention. Previous studies have demonstrated that most mor

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“…Existem evidências de que este processo de condensação do DNA possa ser parcial, resultando no complexo DNAproteína menos estável e aumentando a susceptibilidade à desnaturação 15 . Há ainda sugestão de que esta alteração possa ser causada por defeito na ligação entre os grupos fosfatos do DNA às proteínas nucleares ou por ocorrência de tipo anormal ou desconhecidos de proteína ligada ao DNA 15,16 .…”

Section: Introductionunclassified

“…Alterações no complexo DNA-Proteína dos espermatozóides de mamíferos vêm sendo sugeridas como importantes causas de subfertilidade em várias espécies como bovinos 15,17 , leporinos 17 e humanos 18,19 .…”

Section: Introductionunclassified

Influência do glicerol e etilenoglicol e da criopreservação sobre o complexo DNA-Proteina de espermatozóides em garanhões

Brandão

Arruda

Madureira

et al. 2006

Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci.

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O processo de criopreservação causa estresse físico e químico aos espermatozóides, acarretando alterações bioquímicas, diminuição irreverssível da motilidade espermática, aumento da degeneração do DNA e liberação intracelular de enzimas e lipídeos. No presente estudo, foram estudadas a influência das estações não reprodutiva e reprodutiva, dos crioprotetores glicerol e etilenoglicol e do processo de congelação e descongelação sobre o complexo DNA-proteína de espermatozóides em garanhões. Foi comparados o sêmen puro, o sêmen puro e congelado sem crioprotetores, o sêmen diluído e exposto aos crioprotetores sem congelação e o sêmen diluído e congelado com crioprotetores. Foram utilizados seis garanhões, colhendo 12 ejaculados cada. A patologia do complexo DNA-Proteína foi avaliada em espermatozóides fixados com etanol-ácido-acético glacial 3:1 (v/v), tratados com HCL 4N a 25ºC e corados com azul de toluidina a 0,025% em tampão McIlvaine, empregando microscopia óptica com aumento de 1000x. Os resultados mostraram que a anomalia do complexo DNA-Proteína dos espermatozóides diferem entre os grupos congelados e não congelados (P<0,05). O sêmen congelado sem crioprotetor não apresentou aumento significativo de patologia do complexo DNA-Proteína em relação ao sêmen congelado com crioprotetores, mas ambos mostraram aumento em relação ao sêmen puro ou diluído e exposto aos crioprotetores. A influência da estação reprodutiva mostrou diferença significativa (P<0,05) somente no sêmen puro e no sêmen puro e congelado sem crioprotetor. Conclui-se que o processo de congelação exerce influência negativa sobre o complexo DNA-Proteína de espermatozóides em garanhões.

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Atypical Changes of Deoxyribonucleoprotein During Spermiogenesis Associated With a Case of Infertility in the Bull

Abstract: Summary. Data

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Toluidine blue test for sperm DNA integrity and elaboration of image cytometry algorithm

Toluidine blue test for sperm DNA integrity and elaboration of image cytometry algorithm

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Influência do glicerol e etilenoglicol e da criopreservação sobre o complexo DNA-Proteina de espermatozóides em garanhões

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