ABSTRACT.A protocol for the in vitro germination and callus induction in Pyrostegia venusta, a medicinal plant species from the Brazilian savannah (Cerrado) is provided. The establishment of cultures of P. venusta was originally obtained from seeds germinated in vitro and induced callus directly from leaf explants of seedlings. Seeds were germinated on MS and WPM media containing 100 and 50% of salt concentration, supplemented with 30 g L Germinação in vitro, indução de calos e teores de compostos fenólicos em Pyrostegia venusta (Ker Gawl.) Miers RESUMO. É apresentado um protocolo para a germinação in vitro e indução de calos em Pyrostegia venusta, uma espécie medicinal do Cerrado. O estabelecimento de culturas foi obtido a partir de sementes germinadas in vitro e a indução de calos diretamente de explantes foliares das plântulas obtidas. Sementes foram germinadas em meios MS e WPM contendo 100 e 50% da concentração de sais, suplementado com 30 g L -1de sacarose. A calogênese consistiu na inoculação de segmentos foliares em meio MS acrescido de 2,4-D ou BAP, na presença ou ausência de luz. A percentagem de germinação foi 85%, em média. Partes aéreas e raízes de plântulas obtidas em meio WPM com 50 e 100% da concentração de sais, apresentaram elevados teores de compostos fenólicos totais e flavonoides, em relação àquelas obtidas em meio MS. Calos induzidos com menores concentrações de 2,4-D apresentaram maiores valores de matéria fresca e seca. Todos os tratamentos proporcionaram a obtenção de calos com teores de compostos fenólicos totais e flavonoides iguais ou superiores ao explante inicial, com destaque para os tratamentos com 9,05 μM de 2,4-D e 8,88 μM de BAP, na presença e ausência de luz e 17,75 μM de BAP, na ausência de luz.