Aplicação do cloreto de trifeniltetrazólio no teste de limite microbiano em medicamentos e cosméticos

Abstract

trifeniltetrazólio 4.2.10 Verificação da influência do inóculo, aditivos ao meio de cultura e concentração do cloreto de trifeniltetrazólio no desenvolvimento da coloração ...... 4.2.11 Comparação entre a técnica de tubos múltiplos com sub-cultura e emprego de cloreto de trifeniltetrazólio na detecção de microrganismos viáveis ........ 4.2.12 Detecção de Candida albicans pela técnica de tubos múltiplos com sub-cultura e pela redução do cloreto de trifeniltetrazólio em meio a1ca1inizado 4.2.13 Avaliação da atMdade inibitória do polissorbato 20 e 80 e da lecitina de soja adicionados ao meio de caseína-soja. 4.2.14 Determinação da concentração mínima eficaz do cloreto de trifeniltetrazólio para revelação de colônias bacterianas 4.2.15 Determinação da concentração mínima eficaz do cloreto de trifeniltetrazólio para revelação de colônias de leveduras 83 4.2.16 Determinação da concentração mínima eficaz do cloreto de trifeniltetrazólio para revelação de colônias de bactérias desenvolvidas em meio com opacidade 84 4.2.17 Determinação da concentração mínima eficaz do cloreto de trifeniltetrazólio para revelação de colônias de C. albicans desenvolvidas em meio com opacidade 84 4.2.18 Comparação entre as técnicas de tubos múltiplos com sub-cultura e de semeadura em profundidade mediante revelação das colônias com cloreto de trifeniltetrazólio em amostras de produtos comerciais, inoculadas com microrganismos padrões .. 85 4.2.19 Avaliação da eficiência do cloreto de trifeniltetrazólio aplicado ao método de tubos múltiplos e semeadura em profundidade para determinação de carga microbiana contaminante em amostras comercializadas .. 87 4.2.20 Análise estatística dos resultados 87 5 RESULTADOS 90 6 DISCUSSÃO 6.1 Considerações gerais 6.2 Concentração mínima inibitória do cloreto de trifeniltetrazólio 6.3 Influência da concentração de cloreto de trifeniltetrazólio do inóculo e de aditivos ao meio de cultura no desenvolvimento da coloração 6.4 Comparação entre a técnica de tubos múltiplos com sub-cultura e emprego de cloreto de trifeniltetrazólio na detecção de microrganismos.. 6.5 Determinação da concentração mínima eficaz de cloreto de trifeniltetrazólio para revelação de colônias baeterianas e de leveduras 6.6 Avaliação da eficiência de cloreto de trifeniltetrazólio aplicado aos métodos de tubos múltiplos e de semeadura em profundidade para determinação de carga microbiana em amostras de produtos comerciais 7 PROPOSTA DE MÉTODO ANALÍTICO OACIAL PARA O TESTE DE UMITE MICROBIANO EM MEDICAMENTOS HIDROINSOLÚVEIS FORTEMENTE OPALESCENTES E COM BAIXA CARGA MICROBIANA (NÃO MAIS QUE 10 2 UFC/mL) 7.1 Método para contagem de microrganismos aeróbios em medicamentos e cosméticos, na forma de suspensão ou emulsão pela técnica de tubos múltiplos 7.2. Método para contagem de micror9anismos aeróbios em medicamentos e cosméticos, na forma de suspensao ou emulsão pela técnica de semeadura em profundidade

Frequency of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) non-reducing bacteria in pasteurized milk

“…Use of TTC is highly recommended for milk testing, because the opacity of the plates, specially those containing the less diluted samples, makes the counting unaccurate (16). Many microbiologists use TTC added to the media as an over-lay after incubation rather than added to PCA prior to plating, because TTC may be deleterious to many microorganisms (4).…”

“…For Gram positives, like B.subtilis and S.pyogenes, the minimal inhibitory concentration (MIC) was 0.0032%. Ohara (16) observed that 0.1% and 2% TTC should be used for bacteria and yeasts countings, respectively.…”

Validação de método para avaliação da qualidade sanitária de preparação cosmética de base lipófila

“…Esse método ocasiona a opalescência do meio de cultura, dificultando a observação de colônias. A utilização do cloreto de trifeniltetrazólio promove a coloração das colônias para vermelho, facilitando a contagem, sem, no entanto, comprometer a viabilidade das células no caso de sua adição após o período de incubação (Ohara, Saito, 1993;Ohara, Saito, 1995).…”

Desenvolvimento de métodos microbiológicos rápidos (MMRs) para avaliação da potência de agentes antimicrobianos e suas incertezas de medição

“…Embora o uso do TTC possa inibir o crescimento microbiano, devido a sua toxicidade em altas concentrações, o mesmo foi adicionado ao final do período de incubação do ensaio, portanto não influiu no tamanho do halo de inibição de crescimento, pois é utilizado apenas para torná-lo mais nítido e delimitado com sua coloração avermelhada, facilitando assim a sua medição (BARTLETT et al, 1976, JOHNSON et al, 1985, OHARA et al, 1993, OHARA et al, 1995, GALVÃO et al, 2016. (BRUNTON et al, 2006, KALMAN et al, 1990, SUÁREZ et al, 2009, KATZUNG, et al, 2012, MASOUD et al, 2014 o mesmo apresentou maiores halos de inibição, e nesse caso podemos observar uma maior influência do período de incubação do que os outros antimicrobianos, conforme Figura 11.…”

“…As placas dos ensaios foram incubadas por 5 horas e 30 minutos a temperatura de 37±1°C, e após este período, foram retiradas e então foram adicionadas as soluções incolores de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) 0,3% em ágar 1% e houve uma reação de redução irreversível e consequentemente a formação do precipitado 1,3,5trifeniltetrazólio formazan, (TPF) de intensa coloração avermelhada (BARTLETT et al, 1976, JOHNSON et al, 1985, OHARA et al, 1993, OHARA et al, 1995, YAMAMOTO e PINTO, 1996, BELOTI et al, 1999, KUMAR e TARAFDAR, 2003, AL-ARAJI et al, 2015, SHAWALI e SAMY, 2015, GALVÃO et al, 2016, SAVIANO e LOURENÇO, 2018 (BARTLETT et al, 1976, JOHNSON et al, 1985, OHARA et al, 1993, OHARA et al, 1995, YAMAMOTO e PINTO, 1996, GALVÃO et al, 2016, SAVIANO e LOURENÇO, 2018 A precisão nos ensaios de doseamento microbiológico com solução TTC 0,3% em ágar a 1%, encontrada para a gentamicina foi 3,1%, para a linezolida foi 1,7% e para a vancomicina foi 3,9%, conforme mostrado na Tabela 22. Portanto, todas estão abaixo do limite do DPR < 5,0% e os métodos podem ser considerados precisos.…”