Adhesion of Helicobacter pylori and Escherichia coli to human and bovine surface mucus cells in vitro

Nilius, M.; Bode, Günter; Büchler, M.; Malfertheiner, Peter

doi:10.1111/j.1365-2362.1994.tb02374.x

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“…Dabei kommt nach Mazur [15] dem transmembranösen Wassertransport beim Einfrieren und Auftauen eine zentrale Rolle zu. Die Lagerungsdauer selbst ist von untergeordneter Bedeutung, solange die Lagerungstemperatur hinreichend tief ist; für wäßrige Systeme ist dies nach Franks [16] bei Temperaturen unterhalb der sog. Glasübergangstemperatur der Fall.…”

Section: Kryobiologische Grundlagen Beim Gefrieren Von Zellsuspensionenunclassified

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Übersicht

1996

LaboratoriumsMedizin

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Zusammenfassung: Periphere hämatopoetische Progenitorzeilen werden entweder nur mit Dimethylsulfoxid (DMSO) oder zusammen mit Hydroxyethylstärke (HES) kryokonservierl. Die ursprüngliche Technik beinhaltet die Verwendung von 10% DMSO bei Proteingehalten von 2-4% (Hinzufügen von Albumin oder autologem Plasma), langsames, kontrolliertes Abkühlen (1-2 °C im kritischen Temperaturbereich) und Lagerung in der Dampfphase über Flüsssigstickstoff unterhalb von -120 °C. Ein alternatives Verfahren, das 5% DMSO und 6% HES erfordert, hat sich zusammen mit unkontrolliertem Einfrieren in -85 °C kalten Tiefkühlgeräten ebenfalls bewährt. Für eine Langzeitlagerung sind Temperaturen unterhalb von -120 °C erforderlich, was im allgemeinen den Umgang mit Flüssigstickstoff erfordert. Für eine kurzfristige Aufbewahrung sind allerdings die üblichen Tiefkühlgeräte akzeptabel, solange sie hinreichend tiefe Temperaturen (<-80 °C) garantieren. Das Auftauen wird meist am Bett des Patienten vorgenommen und die Transfusion erfolgt unter sorgfältiger Überwachung. Komplikationen sind meistens auf das verwendete Kryoprotektiv DMSO zurückzuführen, das eine Histaminfreisetzung bewirkt, so daß eine entsprechende Prämedikation erforderlich ist. Schlüsselwörter: Blutkonservierung/Methoden; Kryokonservierung/Methoden; Hämatopoetische Stammzellen; Dimethylsulfoxid; Hydroxyethylstärke. Abstract: Peripheral hematopoietic progenitor cells are cryopreserved in dimethyl sulfoxide (DMSO) with or without hydroxyethyl starch (HES). The original technique involves 10% DMSO and protein levels of 2-4% (addition of albumin or autologous plasma), slow, controlled rates of cooling (1-2 °C/min in the critical temperature region) and storage in the vapor 70 Abbildung 1 Abhängigkeit der Überlebensrate (nach dem Auftauen gemessen anhand der Koloniebildung) von murinen Knochenmarkstammzellen von der Kühlrate bei unterschiedlichen Konzentrationen des Kryoprotektivs (Glycerin). , O, D, A : 0, 0,4, 0,8 und 1,25 mol/l Glycerin Mit zunehmender Konzentration des Kryoprotektivs steigt einerseits die maximale Überlebensrate, andererseits wird die optimale Kühlrate zu niedrigeren Werten verschoben (Daten aus [23]). Kryokonservierungsverfahren für BlutstammzellenPeriphere Blutstammzellen und Knochenmarkstammzellen Vermutlich wegen der ausgezeichneten osmotischen Widerstandsfähigkeit der hämatopoetischen Stammzellen [27] und der über einen weiten Bereich von Kühlraten und Kryoprotektiv-Konzentrationen (s. Abb. 1) stets gegebenen Überlebensfähigkeit nach dem Auftauen konnten sich verschiedene Konservierungsprotokolle etablieren (Übersichten z. B. in [2,28-32], detaillierte Arbeitsvorschriften z. B. in [33,34]). Die für die PBPC eingesetzten Protokolle bedienen sich der gleichen Techniken, wie sie für die im Knochenmark (z. B. [35]) enthaltenen hämatopoetischen Stammzellen entwickelt wurden. Die beiden wesentlichen Unterschiede zwischen Aphereseprodukt (nach Gabe hämatopoetischer Wachstumsfaktoren, z. B. [36-38]) und Knochenmarkaspirat bestehen zum einen in der sowohl insgesamt höheren ...

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Section: Kryobiologische Grundlagen Beim Gefrieren Von Zellsuspensionenunclassified

“…Es haftet an den Epithelzellen der Schleimhaut mittels Adhäsionsfüßchen. Nach der Adhäsion flacht die Zelloberfläche ab und die Microvilli gehen verloren [16]. Die Mehrzahl der Keime lebt im Mucusgel, einige haften an den Epithelzellen.…”

Section: Eigenschaften Von Helicobacter Pyloriunclassified

Übersicht

1996

LaboratoriumsMedizin

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“…Using this reductionist system, H. pylori is shown to adhere to the surface of these cells (Nilius et al 1994) and induce effects that include nuclear factor (NF)-jB activation (Keates et al 1997) and the up-regulation of epidermal growth factor receptor (EGFR) (Keates et al 2007), two known inducers of H-ferritin mRNA expression that may contribute to increased iron storage in gastric epithelial cells (Konijn et al 1999). A recent study found evidence of increased transferrin internalisation in H. pylori-infected polarized Madin Darby Canine Kidney (MDCK) cells (Tan et al 2011) but to date any effect of H. pylori infection on gastric epithelial cell iron homeostasis has not been determined.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Measurement of total iron in Helicobacter pylori-infected gastric epithelial cells

2014

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Despite the evidence suggesting a role for Helicobacter pylori in the induction of systemic iron deficiency anaemia, little is known about the possibility of infection-associated changes in cellular iron homeostasis at the gastric epithelium. In this study we compared four different techniques for measuring iron in AGS cells, a gastric epithelial cell line that is widely used to model to H. pylori infection in vitro. Inductively coupled plasma-mass spectrometry proved to be an efficient method, but only when large numbers of cells were used. Two colorimetric assays that included the use of concentrated hydrochloric acid with or without potassium ferrocyanide detected iron in the micromolar but not the nanomolar range in cell-free standards. However, the third colorimetric assay that incorporated ferrozine proved to be highly accurate at detecting iron in the nanomolar range, and was able to detect iron in AGS cells, Moreover, using this assay, we were able to show that the level of iron in H. pylori-infected AGS cells is significantly increased when compared to uninfected cells.

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“…AGS cells were used to accomplish these goals as have been employed in our earlier studies [9,10]. This human cell line has been used by many investigators for over a decade to study various aspects of gastric epithelial biology [11][12][13].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Oxygen Radical Induced Gastric Mucosal Cell Death: Apoptosis or Necrosis?

2008

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Reactive oxygen species (ROS) and resultant oxidative damage is a common pathway for gastric mucosal injury. This study was undertaken to determine whether apoptosis or necrosis was responsible for hydrogen peroxide (a representative ROS)-induced gastric mucosal death and whether caspase cascade blockade could prevent this process. AGS cells (human gastric adenocarcinoma cells) were exposed to hydrogen peroxide (H(2)O(2)), 0.5-2 mM, from 6 to 24 h. Lactic dehydrogenase (LDH) measured necrosis, whereas Caspase-3 and PARP activation and DNA-histone complex formation measured apoptosis. In addition, AGS cells received no pretreatment or preincubation for 1 h with 50-100 microM z-VAD, a pan-caspase inhibitor, and were then treated with 1-2 mM H(2)O(2). With high concentrations of H(2)O(2), cell death was predominantly necrotic, whereas lower concentrations evoked time and concentration dependent apoptosis. Furthermore, z-VAD pretreatment prevented oxidant induced apoptosis and necrosis. Since caspase cascade blockade prevents both processes, our results support the hypothesis that H(2)O(2) induced cell death is predominantly a caspase-mediated apoptosis.

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Adhesion of Helicobacter pylori and Escherichia coli to human and bovine surface mucus cells in vitro

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Oxygen Radical Induced Gastric Mucosal Cell Death: Apoptosis or Necrosis?

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