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Abstract

Zusammenfassung: Periphere hämatopoetische Progenitorzeilen werden entweder nur mit Dimethylsulfoxid (DMSO) oder zusammen mit Hydroxyethylstärke (HES) kryokonservierl. Die ursprüngliche Technik beinhaltet die Verwendung von 10% DMSO bei Proteingehalten von 2-4% (Hinzufügen von Albumin oder autologem Plasma), langsames, kontrolliertes Abkühlen (1-2 °C im kritischen Temperaturbereich) und Lagerung in der Dampfphase über Flüsssigstickstoff unterhalb von -120 °C. Ein alternatives Verfahren, das 5% DMSO und 6% HES erfordert, hat sich zusammen mit unkontrolliertem Einfrieren in -85 °C kalten Tiefkühlgeräten ebenfalls bewährt. Für eine Langzeitlagerung sind Temperaturen unterhalb von -120 °C erforderlich, was im allgemeinen den Umgang mit Flüssigstickstoff erfordert. Für eine kurzfristige Aufbewahrung sind allerdings die üblichen Tiefkühlgeräte akzeptabel, solange sie hinreichend tiefe Temperaturen (<-80 °C) garantieren. Das Auftauen wird meist am Bett des Patienten vorgenommen und die Transfusion erfolgt unter sorgfältiger Überwachung. Komplikationen sind meistens auf das verwendete Kryoprotektiv DMSO zurückzuführen, das eine Histaminfreisetzung bewirkt, so daß eine entsprechende Prämedikation erforderlich ist. Schlüsselwörter: Blutkonservierung/Methoden; Kryokonservierung/Methoden; Hämatopoetische Stammzellen; Dimethylsulfoxid; Hydroxyethylstärke. Abstract: Peripheral hematopoietic progenitor cells are cryopreserved in dimethyl sulfoxide (DMSO) with or without hydroxyethyl starch (HES). The original technique involves 10% DMSO and protein levels of 2-4% (addition of albumin or autologous plasma), slow, controlled rates of cooling (1-2 °C/min in the critical temperature region) and storage in the vapor 70 Abbildung 1 Abhängigkeit der Überlebensrate (nach dem Auftauen gemessen anhand der Koloniebildung) von murinen Knochenmarkstammzellen von der Kühlrate bei unterschiedlichen Konzentrationen des Kryoprotektivs (Glycerin). , O, D, A : 0, 0,4, 0,8 und 1,25 mol/l Glycerin Mit zunehmender Konzentration des Kryoprotektivs steigt einerseits die maximale Überlebensrate, andererseits wird die optimale Kühlrate zu niedrigeren Werten verschoben (Daten aus [23]). Kryokonservierungsverfahren für BlutstammzellenPeriphere Blutstammzellen und Knochenmarkstammzellen Vermutlich wegen der ausgezeichneten osmotischen Widerstandsfähigkeit der hämatopoetischen Stammzellen [27] und der über einen weiten Bereich von Kühlraten und Kryoprotektiv-Konzentrationen (s. Abb. 1) stets gegebenen Überlebensfähigkeit nach dem Auftauen konnten sich verschiedene Konservierungsprotokolle etablieren (Übersichten z. B. in [2,28-32], detaillierte Arbeitsvorschriften z. B. in [33,34]). Die für die PBPC eingesetzten Protokolle bedienen sich der gleichen Techniken, wie sie für die im Knochenmark (z. B. [35]) enthaltenen hämatopoetischen Stammzellen entwickelt wurden. Die beiden wesentlichen Unterschiede zwischen Aphereseprodukt (nach Gabe hämatopoetischer Wachstumsfaktoren, z. B. [36-38]) und Knochenmarkaspirat bestehen zum einen in der sowohl insgesamt höheren ...