A study of the efficiency of different methods to transfer a reporter gene to chicken embryonic cells

Recent advances in the development of new transgenic animal technology

“…Using PGCs to produce transgenic animals is a new technique developed because of its advantages in excellent operability, high production, and an induced germline modification [46][47][48]. In combination with gene targeting technology, it will significantly enhance transgenic efficacy and accuracy, and has broad application in transgenic animal research.…”

New advances in animal transgenic technology

“…的原始生殖细胞都可以作为转基因的受体细胞 [6] , 故以其作为载体进行转基因研究较为简便、高效, 并逐渐引起关注。 Natio等 [7] 从早期鸡胚血液分离得到了PGCs, 利 年, Van de Lavoir等 [8] 将携带有绿色荧光蛋白基因的 PGC注入孵化 3 d的鸡胚内, 将孵化出的公鸡与未转 入基因的母鸡交配, 成功获得生殖腺转入外源基因 并带有绿色荧光的雏鸡。而对于哺乳动物, Brinster 等 [9] 则证明了可以通过雄性个体之间的精原细胞转 移来制备转基因动物, 他们向C57BL6×STL杂交一 代小鼠的曲精细管内注入ZFlacZ系小鼠的PGC, 结 果证明植入的PGC成功发育为精子细胞, 并能够受 精产生后代。 另外, Mueller等 [10] 的报道中指出从转基 因猪分离出的PGC具有一定的嵌合能力, 从而证实了 利用PGC进行猪或其它大动物转基因的可行性。 利用原始生殖细胞进行转基因来制备转基因动 物有很大的优势, 其可操作性强, 可以大量制备 [11,12] [13] 首次成功地用显微注射法将ES细胞 移入囊胚腔, 并移植回假孕母鼠, 获得生殖系嵌合 体, 经过适当的交配, 获得了源于ES细胞系的纯系 小鼠。1987 年, Thomas等 [14] 选择小鼠ES细胞为靶细 胞进行基因打靶, 建立了次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 克隆动物的制备效率 [16] 。为解决这一问题, Yang等 [17] 第 32 卷 选择将体细胞核移植到同一母牛的去核卵子细胞内, 此克隆的同体重组胚中基因重排明显优于异体重组胚, 其囊胚发育率也明显高于异体胚。另外, 2004 年 Kuroiwa等 [18] 应用该技术制备出无疯牛病的牛, 2005 年Wall等 [19] 制备了不发生乳房炎的奶牛, 2006 年Lai等 [20] 制备出能够合成多不饱和脂肪酸的猪。2008 年 Baldassarre等 [21] [22] 利用这种策略 首先实现了DNA聚合酶β基因在T细胞的灭活。 该系统包括Cre重组酶和loxP位点两部分 [23,24] , 特定组织器官的局部敲除 [26] 。这一策略特别适用于 研究一些胚胎期必需基因的功能和广泛表达的基因 在某一特定组织中的功能。 相反, 利用Cre/LoxP系统 还可以实现条件性基因修复, 如将两个loxP位点插 入到某个功能基因中, 即可根据时间需要通过药物 诱导激活Cre重组酶, 切除两个loxP位点之间的片段 使目的基因重新恢复功能 [27] 。 Rendahl等 [28] 达下调沉默 [30,31] , 从而实现基因表达调控的时空性 和可逆性。 双链小分子RNA(siRNA)可通过互补序列特异 地结合目标mRNA, 被结合的mRNA将不再翻译而 使动物表现出特定的性状改变。例如, 2005 年Acosta 等 [32] 设计了斑马鱼myostatin基因的干扰片段并注入 其受精卵, 这段干扰片段即双链小分子RNA干扰了…”