A Restriction enzyme from Hemophilus influenzae

Smith, Hamilton O.; Wilcox, Kent W.

doi:10.1016/0022-2836(70)90149-x

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“…Em 1970, Hamilton Smith e Kent W. Wilcox descobriram a primeira enzima de restrição do tipo II, que permitiu o corte de moléculas de DNA em sítios específicos (10), que eram depois separados por eletroforese em gel. Isso permitiu aos cientistas isolar genes de genoma de um organismo (11 (17).…”

Section: Usando Dados De Difração De Raios -X Assim Como Outros Dadounclassified

Estudos moleculares sobre o vírus da hepatite B

Pinho¹

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EPIDEMIOLOGIA DA HEPATITE B NO BRASIL E NO MUNDOA hepatite B é uma doença de distribuição universal, presente em todos os continentes, porém com variações nos níveis de endemicidade. A Organização Mundial de Saúde estima que cerca de 2 bilhões de pessoas tenham sido infectadas pelo HBV O HBV é transmitido principalmente através do sangue, mas outros fluidos como sêmen, secreções vaginais e saliva podem estar envolvidos na transmissão desse agente. Há três principais formas de transmissão do HBV: vertical, sexual e parenteral (7).Nas áreas com prevalência intermediária ou alta a maioria dos indivíduos se infecta no momento do nascimento (transmissão vertical) ou durante os primeiros anos da infância pelo contato com portadores do vírus, o que ocorre com mais frequência entre membros da mesma família. Já nas áreas de baixa prevalência a infecção é adquirida primariamente durante a vida adulta, principalmente pela via sexual (33, 34).Em geral, quando a infecção pelo HBV ocorre em indivíduos adultos, a mesma tende a evoluir para a cronicidade em cerca de 5% dos indivíduos infectados. ESTRUTURA DO HBVAs células infectadas pelo HBV produzem diferentes tipos de partículas relacionadas ao vírus, as quais podem ser identificadas por microscopia eletrônica no PROTEÍNAS VIRAIS ANTÍGENOS DE SUPERFÍCIE (ENVELOPE)O principal antígeno do envelope do HBV é o HBsAg, mas também encontramos as proteínas L ("large") e M ("medium"), que contém os antígenos correspondentes às regiões pré S1 e pré S2 do genoma viral, além de compartilharem as regiões antigênicas do HBsAg. O HBsAg é encontrado no envelope viral em sua forma não -glicosilada (p25) e glicosilada (gp29), a proteína M em duas formas glicosiladas (gp33 e gp36) e a proteína L em uma forma não -glicosilada (p39) e outra glicosilada (gp42) (60).A principal proteína do envelope do HBV é denominada de HBsAg, é altamente imunogênica e é a base da vacina utilizada contra a infecção pelo HBV, que inicialmente consistia em HBsAg isolado do plasma de indivíduos infectados e atualmente são utilizadas proteínas HBs purificadas produzidas por engenharia genética. Os anticorpos anti-HBs gerados pela vacinação ou que constituem a imunoglobulina hiperimune são predominantemente dirigidos contra um epítopo antigênico presente no HBsAg denominado de determinante "a" (59, 61).As proteínas L e M estão presentes em maior proporção nas partículas virais íntegras e partículas ocas cilíndricas e têm um papel fundamental na infecção pelo HBV, participando no processo de captação do vírus pelas células hepáticas e do processo de morfogênese da partícula viral (62).As proteínas L, M e S compartilham um domínio na extremidade carboxila com quatro hélices putativas para ancoragem na membrana. As duas extensões terminais ANTÍGENO HBx (HBxAg)Além destas proteínas, pelo menos duas outras são produzidas pelo HBV, oHBxAg e a DNA polimerase viral. A presença da proteína HBxAg foi inferida pela descoberta de uma fase de leitura aberta na sequência do genoma viral.Posteriormente, a clonagem de segmentos des...

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Section: Usando Dados De Difração De Raios -X Assim Como Outros Dadounclassified

Estudos moleculares sobre o vírus da hepatite B

Pinho¹

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“…Much of that work was carried out by the Swiss microbiologist and geneticist Werner Arber and his student Daisy Dussoix, who showed that the DNA of restricted phage is enzymatically degraded (9). In 1970, Hamilton Smith and his colleagues at Johns Hopkins University reported that a restriction enzyme they named HindII-a protein isolated from the bacterial pathogen, Haemophilus influenzae-recognizes particular nucleotide sequences in DNA and cuts duplex DNA site-specifically at these sequences (36). The following year, Karen Danna and Daniel Nathans found that the HindII endonuclease cleaves DNA of the mammalian tumor virus SV40 into 11 fragments that can be separated by acrylamide gel electrophoresis, demonstrating the utility of restriction endonucleases for DNA analysis (37).…”

Section: Restriction Endonucleasesmentioning

confidence: 99%

DNA cloning: A personal view after 40 years

Cohen

2013

Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.

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In November 1973, my colleagues A. C. Y. Chang, H. W. Boyer, R. B. Helling, and I reported in PNAS that individual genes can be cloned and isolated by enzymatically cleaving DNA molecules into fragments, linking the fragments to an autonomously replicating plasmid, and introducing the resulting recombinant DNA molecules into bacteria. A few months later, Chang and I reported that genes from unrelated bacterial species can be combined and propagated using the same approach and that interspecies recombinant DNA molecules can produce a biologically functional protein in a foreign host. Soon afterward, Boyer's laboratory and mine published our collaborative discovery that even genes from animal cells can be cloned in bacteria. These three PNAS papers quickly led to the use of DNA cloning methods in multiple areas of the biological and chemical sciences. They also resulted in a highly public controversy about the potential hazards of laboratory manipulation of genetic material, a decision by Stanford University and the University of California to seek patents on the technology that Boyer and I had invented, and the application of DNA cloning methods for commercial purposes. In the 40 years that have passed since publication of our findings, use of DNA cloning has produced insights about the workings of genes and cells in health and disease and has altered the nature of the biotechnology and biopharmaceutical industries. Here, I provide a personal perspective of the events that led to, and followed, our report of DNA cloning.restriction enzyme | pSC101 | EcoRI | genetic engineering | gene cloning

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“…Restriction endonucleases were discovered originally as a bacterial defensive mechanism (restriction-modification system) against the invading phages or plasmid DNA in 1970 [1]. A similar but RNA-based adapted heritable immune system of bacteria was found recently using CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat/CRISPR associated protein 9) [2] [3].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Review: Plant Genome Editing Targeted by RNA-Guided DNA Endonuclease CRISPR/Cas9

Murai¹

2017

AJPS

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This review chronicles the development of the research on CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat/CRISPR associated protein 9) during the last 30 years from the discovery of CRISPR sequence, of biological significance and of the molecular mechanism for adaptive bacterial immunity. It describes recent works on structural and functional diversity of CRISPR/Cas systems, and on three-dimensional structure-based improvements of on-target specificity of CRISPR/Cas9 and Cpf1 endonucleases. The review ends with the application of CRISPR/Cas9 to targeted editing of plant genomes. Importantly, plant commodities modified by CRISPR-Cas9 have not been considered as genetically modified organisms (GMO) as long as foreign DNAs from plant pests were not introduced, according to the recent determination by the USDA.

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A Restriction enzyme from Hemophilus influenzae

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