&lt;b&gt;Dry and wet diets with and without phytase for growing and finishing pigs

Oliveira, Luiz Alberto Garcia de; Nunes, Romão da Cunha; Rufino, Luciana Moura; Roner, Márcia Nunes Bandeira; Stringhini, José Henrique; Castro, Izabela Cruvinel Di

doi:10.4025/actascianimsci.v36i3.22860

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“…As proteínas fosfatases tirosina (PTPs), são uma nova classe de fitases, recentemente isoladas de várias bactérias anaeróbias do rúmen de gado (NAKASHIMA et al, 2007). As PTPs estão envolvidas na desfosforilação de uma variedade de substratos, com frequente implicação na sinalização celular de vírus (GRUNINGER et al, 2014 (HUSSIN et al, 2007;YIN et al, 2007;YAO et al, 2011;SINGH;JOSHI;LEI et al, 2013;DE OLIVEIRA et al;NUGE et al, 2014).…”

Section: Fitasesunclassified

Clonagem, expressão e caracterização de fitase do fungo termofílico >i<Myceliophthora thermophila>/i<

Ferreira¹

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Fitases são enzimas que hidrolisam o ácido fítico, substâncias orgânicas complexas amplamente encontradas na natureza, principalmente em cereais e leguminosas. Nesses alimentos vegetais, o fitato é a principal fonte de fósforo, correspondendo entre cinquenta a oitenta por cento do conteúdo de fósforo orgânico. Entretanto, o fósforo do fitato é muito pouco utilizado por humanos e outros animais monogástricos, como suínos e aves, devido à ausência ou insuficiência das enzimas que o degradam. Assim, rações contêm o fósforo orgânico do fitato e fósforo inorgânico adicionado, que é um mineral caro e não renovável. Em áreas de criação intensiva o excesso de fósforo é excretado no ambiente, causando problemas, tais como a eutrofização. Devido aos problemas ambientais e ao alto custo do fósforo inorgânico, a suplementação de enzimas, principalmente fitases, tem ganhado destaque, entre elas, as enzimas fúngicas, devido a sua estabilidade a diferentes temperaturas e pH. Além disso, técnicas de engenharia genética permitem a transferência de genes entre espécies, resultando em muitos benefícios, principalmente em relação ao aumento e melhoramento na produção de enzimas industriais. O objetivo deste trabalho foi realizar a clonagem, expressão heteróloga, purificação e caracterização bioquímica da enzima fitase (MtPhy) obtida a partir do fungo termofílico M. thermophila. O gene que codifica a enzima foi clonado no vetor pEXPYR e heterologamente expresso em A. nidulans. A proteína recombinante foi purificada e teve sua identidade confirmada por espectrometria de massas. Nas análises bioquímicas, apresentou pH ótimo de 5,0 e temperatura ótima de 60°C e manteve praticamente 100% de sua atividade a 50°C por 2 horas e pela análise de dicroísmo circular e ThermoFluor, apresentou desenovelamento de sua estrutura nas temperaturas de 63 e 67°C, respectivamente. Demonstrou atividade aumentada na presença de CaCl 2 e MgCl 2 e foi fortemente inibida por FeCl 3 , CuSO 3 e SDS. Sua atividade específica (954,8 U/mg) utilizando fitato de sódio foi bastante superior a de outras fitases descritas na literatura. Demonstrou-se efetiva na liberação do fósforo em rações e extremamente resistente às proteases, tripsina e pepsina, presentes no trato digestório de animais monogástricos, demonstrando dessa forma, seu elevado potencial para aplicação industrial. Palavras-chave: Fitases. Fungos termofílicos. Myceliophtora thermophila.

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