Algumas Bactérias do Ácido Lático (BAL), quando ingeridas em quantidades adequadas, são capazes de impactar positivamente o hospedeiro, sendo consideradas probióticas. Para serem utilizadas, essas bactérias devem ter sua identidade conhecida e apresentar características específicas. Nesse estudo, BAL foram isoladas a partir de amostras de leite não pasteurizado e caracterizadas in vitro quanto ao potencial probiótico. Após isolamento, as colônias foram analisadas por coloração de Gram e teste de catalase; DNA total foi extraído e o rDNA 16S foi amplificado e sequenciado. Análise filogenética foi realizada para reconstrução da história evolutiva dos isolados. Os isolados foram avaliados quanto à resistência ao pH ácido e à presença de sais biliares. A atividade antagonista das bactérias isoladas foi avaliada utilizando teste de sobrecamada e o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos foi realizado pelo método de disco difusão. Do total de 13 bactérias isoladas, três foram caracterizadas como bastonetes Gram-positivos e catalase negativos, apresentando 99% de identidade com Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei e Weisella paramesenteroides. Os isolados apresentaram resistência in vitro ao estresse ácido e à presença de sais biliares; mostraram perfil de resistência semelhante aos antimicrobianos e capacidade de inibir o crescimento de bactérias potencialmente patogênicas, como Staphylococcus saprophitycus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium. Diante das características comprovadas, as bactérias láticas isoladas neste trabalho apresentam potencial probiótico.