DNA e aperfeiçoamento das técnicas de extração

Abstract

As técnicas de otimização da extração de DNA para a utilização na reação da polimerização em cadeia (PCR) têm permitido a investigação de diferentes amostras biológicas mesmo quando o DNA está presente em pequenas quantidades. Vários campos da ciência são beneficiados com esse aperfeiçoamento, como a medicina forense, as investigações criminais, exclusão de paternidade, a busca de marcadores tumorais ou agentes infecciosos, e o transplante de medula identificando a pega do enxerto. Pontas de cigarro, saliva, esfregaço bucal, soro, bulbos capilares, entre outros, podem fornecer informações importantes desde que analisados de forma adequada.Neste volume, Barea e colaboradores, do Laborató-rio de Biologia Molecular do Hemocentro de BotucatuUnesp, apresentam técnicas para a extração do DNA a partir de amostras biológicas variadas incluindo material de arquivo como tecido incluído em parafina, lâmina de hemograma e mielograma, gotas de sangue em Guthrie card; e fontes escassas, como esfregaço bucal, urina e bulbos capilares. O grupo teve por objetivo caracterizar o melhor método de extração, purificação e amplificação de DNA para cada amostra e padronização dos procedimentos técnicos a serem incluídos e apresentados no manual de Procedimentos Operacionais Padrão do Laboratório de Biologia Molecular do Hemocentro -HC-UnespBotucatu.Outros grupos, como Heywood e colaboradores, 1 têm desenvolvido protocolos semelhantes mostrando ser possível a extração de DNA a partir de cabelo humano com a técnica de PCR para a amplificação do lócus HLA-DQA. 1Os achados do grupo relatam que os maiores ní-veis de DNA foram encontrados na raiz capilar e que o uso de surfactantes para lavagem ou tinturas pode levar a diminuição desses valores.A obtenção do DNA genômico pelos métodos convencionais inclui lise celular e procedimentos que tornam o DNA disponível para a extração. Para isso, vários são os passos laboratoriais necessários tornando o procedimento longo e fazendo com que o rendimento e a pureza do material nem sempre sejam adequados e que as concentrações inicialmente estimadas necessitem de reajustes para a seqüência do protocolo. Além disso, a excessiva manipulação da amostra pode degradar o DNA em vários níveis.Hosono e colaboradores 2 relatam a importância da obtenção de DNA por métodos não invasivos, mesmo que em pequenas quantidades, principalmente em recém-nascidos. O grupo utilizou um protocolo específico para a obtenção de DNA diretamente da amostra biológica sem a necessidade de manipulação amplificando o genoma global (WGA) e gerando uma grande quantidade de DNA a partir de poucas células em comparação ao método convencional de extração e purificação. A técnica permitiu a amplificação direta a partir de amostras biológicas, como esfregaço bucal, sangue total, gota de sangue, avental de trabalho, e Guthrie cards.A utilização das células obtidas através de esfregaço bucal para a obtenção de DNA tem sido criticada por alguns autores pela variação no rendimento e qualidade do DNA. 3Para que a técnica possa ser aplicada com ...

DNA extraction methods of canine sperm cells to sexing by quantitative PCR

“…PCR allows DNA replication in vitro and amplification of specific sequences with high sensitivity and specificity (Bueno, 2004;Mothé et al, 2018a). However, appropriate quality and quantity of DNA are necessary for efficient PCR use.…”

Evaluation of eight protocols for genomic DNA extraction of Hypostomus commersoni Valenciennes, 1836 (Loricariidae: Siluriformes)

“…With the availability of a plethora of molecular analysis machinery, there is an exponential demand for high-quality samples, capable of generating great results with a minimum of errors. To accomplish this, commercial kits were developed, aiming for DNA extractions of excellence (Coombs et al, 1999;Barea et al, 2004;Bueno, 2004).…”

Análise Dos Riscos Da Automedicação E a Prevalência Desse Hábito Entre Os Acadêmicos Da Faculdade Unicesumar Campus Ponta Grossa

“…Os estudos através de marcadores moleculares de DNA podem ser divididos em três grupos: os baseados em hibridizações, os baseados na Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e por último, os baseados em sequenciamento (ZOLET, 2017). As técnicas que utilizam PCR dependem diretamente da qualidade e quantidade adequada do DNA extraído (BUENO, 2004). Dessa forma, a obtenção de DNA de boa qualidade é pré-requisito fundamental para o sucesso em análises moleculares (ARBI et al, 2010).…”