Efeitos do STI571 e da citarabina sobre a proliferação e a seleção “in-vitro” de células progenitoras hematopoéticas na leucemia mielóide crônica

Abstract

Resumo de TeseRev. bras. hematol. hemoter. 2003;25(2):121-124 Marina A. Coutinho Orientador Dimas T. CovasResumo Os objetivos deste estudo foram avaliar, com metodologia de cultivo in-vitro de progenitores hematopoéticos, o efeito das drogas STI571 e citarabina sobre a proliferação de células mononucleares de pacientes com leucemia mielóide crônica, o crescimento de colônias hematopoéticas CFU-GM, estudar por mé-todo de citometria de fluxo a porcentagem de células apoptóticas e identificar a presença do gene de fusão BCR/ABL nas colônias sobreviventes por RT-PCR e FISH nas amostras de pacientes com leucemia mielóide crô-nica após exposição das células à citarabina e STI571 a cada tempo e concentração determinada das drogas. Foi utilizado, como material, sangue periférico e medula óssea, obtida por punção aspirativa esternal ou da crista ilíaca posterior, de pacientes com LMC Ph positivo na fase crônica, durante o processo clínico de tratamento e avaliação. Sangue periférico de doadores voluntários normais usados como controle. Células mononucleares de sangue periférico e medula óssea foram separadas por gradiente de Ficoll-Hypaque, submetidas a tratamento com as drogas citarabina e STI571 em diferentes concentrações e pelos tempos de 24, 48 e 72 horas, avaliadas quanto à proliferação, crescimento de colônias CFU-GM, apoptose e identificação da progênie pelas técnicas de FISH e RT-PCR. Nos ensaios de proliferação, a citarabina teve efeito inibitório não seletivo proporcionalmente à dose, mas não em relação ao tempo de exposição, tanto em controles normais, como na LMC. O STI571 foi também dose dependente e não tempo dependente, no entanto houve efeito seletivo sobre as células LMC em baixas doses; em dose elevada inibiu também os controles normais. Nos ensaios clonogênicos, a citarabina demonstrou efeito inibitório dose e tempo dependente e não seletivo, quanto ao STI571, não se demonstrou diferença estatisticamente significante entre tempo e dose nas células da LMC, também com efeito seletivo em baixas doses, sobre estas células. A quantificação da apoptose não demonstrou diferença significativa na maioria dos ensaios. RT-PCR BCR/ABL realizado em 16 colônias mostrou-se positivo em 12 e negativo em 4 colônias. Positividade pelo FISH foi encontrada em 18 colônias, resultado inconclusivo em 4 e não informativo em 4. Em nenhum caso foi definitivamente negativo. O desenvolvimento desse trabalho demonstrou a factibilidade do emprego desse conjunto de metodologias para o estudo de modalidades terapêuticas da LMC e demonstração do efeito clonal seletivo dessas terapias.Palavras-chave: Leucemia mielóide crônica; cé-lulas progenitoras hematopoéticas; ensaio clonogênico; proliferação; citarabina; STI571; RT-PCR; hibridização insitu por fluorescência; BCR/ABL. Resumo de Tese/ThesisEfeitos do STI571 e da citarabina sobre a proliferação e a seleção "invitro" de células progenitoras hematopoéticas na leucemia mielóide crônica A Effects of STI571 and cytarabine in hematopoietic progenitor cell proliferation and "in-vitro" se...