Semen cryopreservation protocols of Mangalarga Marchador stallions

Abstract

The effect of the utilization of three semen protocols (Inra 82®, Merck Gema and Botu-crio®) and two filling techniques (0.25 and 0.50 mL straws) in Mangalarga Marchador stallions were studied in this experiment. Sperm parameters were assessed during processing and post-freezing. No interactions between the protocols and type of filling were observed, so they were assessed separately. Sperm parameters were not altered when the extender was added to the centrifugation; however, there was reduction of motility and strength when freezing extenders were added. The Botu-crio® protocol preserved the parameters of total and progressive sperm motility, smoothed path velocity (µm/s), straight line velocity (µm/s), track velocity (µm/s) and the average and fast spermatozoa percentage better than the others. No difference between the extenders for the percentage of sperm integrity was observed. There was no difference in the responses studied on the filling techniques. The stallions presented better freezing with the use of the Botu-crio® protocol. The best post-freezing viability results were found for semen frozen using the Botu-crio® protocol and there were no differences concerning the sperm quality comparing 0.25 and 0.50 mL straws

Utilização De Diferentes Diluentes Na Criopreservação De Espermatozoides De Garanhões Mangalarga Marchador

“…Para a criopreservação de espermatozoides de 55 garanhões de diferentes raças com diluentes contendo 5% de glicerol ou 5% de dimetilformamida como crioprotetores, Alvarenga et al (9) verificaram motilidade progressiva superior com a (10) demonstraram que diluentes à base de amidas são mais eficazes na proteção aos espermatozoides, resultando em motilidade progressiva pós-descongelamento superior quando comparado aos que contém apenas glicerol (FR5). Candeias et al (11) , ao avaliarem três meios de criopreservação, dois deles com 4% de glicerol e outro com 1% de glicerol e 4% de metilformamida, obtiveram efeitos superiores de motilidade total para este último. O mesmo resultado foi encontrado com os meios utilizados no presente experimento, em que as variáveis analisadas foram superiores para os que contêm 1 ou 2% de glicerol e a metilformamida.…”

“…Alvarenga et al (15) observaram que o glicerol em concentrações próximas a 5% foi o crioprotetor que induziu ao maior estresse osmótico na célula espermática, levando à redução dos valores das variáveis motilidade, viabilidade e integridade de membrana, fato também observado para o sêmen criopreservado dos garanhões da raça Mangalarga Marchador com o FR5. Pace e Sullivan (16) verificaram que o glicerol em concentrações superiores a 3%, ou quando usado de forma isolada em concentrações superiores a 5%, exerce efeito tóxico sobre o espermatozoide equino, fato esse evidenciado para garanhões de raças consideradas de baixa congelabilidade, como o Mangalarga Marchador e outras raças nacionais (3,8,11,12) . Os resultados superiores de integridade das membranas plasmática e acrossomais encontrados neste experimento com os diluentes contendo metilformamida corroboram os resultados de Terraciano et al (10) e Medeiros (17) ; contudo, Alvarenga et al (9) , Candeias et al (11) e Ferreira (18) não observaram diferenças na preservação da integridade de membrana quando compararam protocolos de criopreservação com glicerol e amidas.…”

“…Pace e Sullivan (16) verificaram que o glicerol em concentrações superiores a 3%, ou quando usado de forma isolada em concentrações superiores a 5%, exerce efeito tóxico sobre o espermatozoide equino, fato esse evidenciado para garanhões de raças consideradas de baixa congelabilidade, como o Mangalarga Marchador e outras raças nacionais (3,8,11,12) . Os resultados superiores de integridade das membranas plasmática e acrossomais encontrados neste experimento com os diluentes contendo metilformamida corroboram os resultados de Terraciano et al (10) e Medeiros (17) ; contudo, Alvarenga et al (9) , Candeias et al (11) e Ferreira (18) não observaram diferenças na preservação da integridade de membrana quando compararam protocolos de criopreservação com glicerol e amidas. Neste experimento, quando se utilizou apenas o glicerol como crioprotetor (FR5), o resultado de motilidade total pós-descongelamento foi 30%, enquanto para concentrações de 1 ou 2% de glicerol, em combinação com a metilformamida e dimetilformamida (Botucrio e FR6), a motilidade foi superior a 30%, dados semelhantes aos encontrados por Candeias et al (11) e Oliveira et al (12) .…”

“…Os resultados superiores de integridade das membranas plasmática e acrossomais encontrados neste experimento com os diluentes contendo metilformamida corroboram os resultados de Terraciano et al (10) e Medeiros (17) ; contudo, Alvarenga et al (9) , Candeias et al (11) e Ferreira (18) não observaram diferenças na preservação da integridade de membrana quando compararam protocolos de criopreservação com glicerol e amidas. Neste experimento, quando se utilizou apenas o glicerol como crioprotetor (FR5), o resultado de motilidade total pós-descongelamento foi 30%, enquanto para concentrações de 1 ou 2% de glicerol, em combinação com a metilformamida e dimetilformamida (Botucrio e FR6), a motilidade foi superior a 30%, dados semelhantes aos encontrados por Candeias et al (11) e Oliveira et al (12) . Gomes et al (3) observaram que, de 17 garanhões utilizados para a criopreservação de sêmen, as variáveis pós-descongelamento foram superiores quando se utilizou metilformamida e dimetilformamida em 15 deles.…”

“…Segundo Gomes et al (3) , o uso das amidas em garanhões de boa congelabilidade não proporciona melhora da motilidade e os resultados são semelhantes àqueles obtidos com o glicerol. Entretanto, em garanhões que apresentam baixa tolerância à criopreservação, como a maioria das raças nacionais, as amidas são mais eficazes em conferir proteção à célula espermática (3,8,11,12) . Os resultados deste experimento reafirmaram os relatos da literatura quanto à combinação das amidas com o glicerol ser mais eficaz que a utilização isolada do glicerol como crioprotetor, em especial numa raça considerada como de baixa resistência ao processo de criopreservação, como o Mangalarga Marchador.…”