Oxalate determination in urine using an immobilized enzyme on sorghum vulgare seeds in a flow injection conductimetric system

Abstract

Desenvolveu-se um método por injeção em fluxo para determinação de oxalato em urina, baseado na utilização da oxalato oxidase (E.C. 1.2.3.4) imobilizada em sementes trituradas de Sor ghum vulgare, variedade BR-303. Amostras de 200 µL contendo oxalato são introduzidas num fluxo de água deionizada que passa por um reator, em forma de coluna, preenchido com o ma te rial enzimático ativado. O dióxido de carbono produzido pela reação enzimática é conduzido, pelo fluxo, até uma cela de permeação, contendo uma membrana de PTFE, onde permeia para um outro fluxo de água deionizada. Este fluxo passa por uma cela de condutividade. A presença de dióxido de carbono provoca uma diferença na condutividade, proporcional à concentração de oxalato originalmente presente na amostra. Os resultados obtidos mostram uma faixa de linearidade en tre 0,05 e 0,50 mmol dm -3. O método proposto, quando comparado com o procedimento enzimático da Sigma, mostra uma boa correlação (Y = 0,006( ±0,016) + 0,98( ±0,019) X, r = 0,9995, Y = condutividade em µS e X = concentração em mmol dm -3 ), seletividade e sensibilidade. O novo procedimento de imobilização promove grande aumento de estabilidade da enzima permitindo a determinação de oxalato por cerca de seis meses. Cerca de 13 determinações podem ser realizadas por hora. A precisão do método proposto é bastante satisfatória (d.p.r. = ± 3,2 %).A flow-injection (FI) method was de vel oped for the de ter mi na tion of ox a late in urine. It was based on the use of ox a late oxidase (E.C. 1.2.3.4) im mo bi lized on ground seeds of the BR-303 Sor ghum vulgare va ri ety. A re ac tor was filled with this ac ti vated ma te rial, and the sam ples (200 µL) con tain ing ox a late were passed through it, car ried by a deionized wa ter flow. The car bon di ox ide pro duced by the en zyme re ac tion per me ated through a microporous PTFE mem brane, and was re ceived in a wa ter ac cep tor stream, pro mot ing con duc tiv ity changes propor tional to the ox a late con cen tra tion in the sam ple. The re sults ob tained showed a use ful lin ear range from 0.05 to 0.50 mmol dm -3 . The pro posed method, when com pared with the Sigma enzy matic pro ce dure, showed good cor re la tion (Y = 0.006( ±0.016) + 0.98( ±0.019)X; r = 0.9995, Y = con duc tiv ity in µS, and X = con cen tra tion in mmol dm -3), se lec tiv ity, and sen si tiv ity. The new im mo bi li za tion ap proach pro motes greater sta bil ity, al low ing ox a late de ter mi na tion for 6 months. About 13 de ter mi na tions can be per formed per hour. The pre ci sion of the pro posed method is about ± 3.2 % (r.s.d).

Uso analítico de tecidos e de extratos brutos vegetais como fonte enzimática

“…O tempo de resposta foi de 60 s e uma linearidade de 1,0x10 -3 a 4,0x10 -3 mol L -1 de oxalato foram obtidos. Empregando esse mesmo material biológico, Oliveira-Neto et al 77 desenvolveram um procedimento em fluxo com detecção condutométrica para determinação de oxalato em urina. Uma curva analítica para oxalato em concentrações variando de 0,05 a 0,5 mmol L -1 foi obtida e os teores desse analito encontrados em várias amostras empregando esse sistema em fluxo foram comparados com aqueles teores empregando o mesmo sistema em fluxo, mas com enzima pura (r=0,9995).…”

Electrochemical Determination of Oxalate at Pyrolytic Graphite Electrodes

“…Enzymatic systems based either on the pure oxalate oxidase enzyme [13] or on the naturally immobilized enzyme [14], employing conductimetric [15], spectrophotometric [16,17], biothermochip [18], potentiometric [19] and amperometric detection [20 -23] have been described for the determination of oxalate in different matrices, including biological samples. Amperometric biosensors, however, suffer from significant interference problems.…”

Avaliação e caracterização da pastilha sensora de um eletrodo de segunda espécie sensível a oxalato

“…A maioria dos procedimentos de análise de oxalato são, muitas vezes, complicados e/ou dispendiosos devido aos reagentes e aparelhos necessários [2,8,9,10,13]. A detecção do oxalato é feita de forma indireta em muitos casos.…”

“…Contínuas investigações vêm sendo feitas enfocando este íon, bem como seus sais insolúveis. A grande demanda está principalmente no campo da medicina, laboratórios de análises clínicas e nas indústrias farmacêutica e de alimentos, tornando muito importante os estudos relacionados com o comportamento de sistemas contendo o íon oxalato e seus sais [6].A maioria dos procedimentos de análise de oxalato são, muitas vezes, complicados e/ou dispendiosos devido aos reagentes e aparelhos necessários [2,8,9,10,13]. A detecção do oxalato é feita de forma indireta em muitos casos.…”