Comparative analysis of preparation of human hepatocytes by the ethylenediamine tetraacetic acid and collagenase technique

Abstract

Purpose:To compare the viability of human hepatocytes dissociated by the ethylenediaminetetraacetic acid and collagenase techniques. Methods: Hepatocytes were prepared by dissociation of liver fragments obtained from hepatectomies performed for therapeutic purposes at the Service of Digestive Tract Surgery, Federal University of Triângulo Mineiro. Results: During the first 4 days of the experiment, 70% of the cells presented birefringent membranes and were not stained with 2% erythrosine, and were therefore considered to be viable. During the first 3 days, hepatocyte viability was on average 71% in the EDTA group and 76% in the collagenase group, with no significant difference between groups. No significant difference was observed between groups at any time. The secretion of albumin by the cultured hepatocytes was preserved up to the seventh day. Mean albumin secretion during the first 3 days was 50 µg/ml in the two groups and a reduction of albumin production was observed from the fourth to the seventh day. Again, no significant difference was observed between groups at any time. Conclusion: Cell viability and preservation of albumin secretion by hepatocytes are similar for the EDTA and collagenase techniques. Key words: Cell Separation. Cell Transplantation. Edetic Acid. RESUMO Objetivo:Comparar a viabilidade dos hepatócitos humanos dissociados pelas técnicas do ácido etilenodiaminotetracético e da colagenase. Métodos: Hepatócitos foram preparados pela dissociação de fragmentos de fígado, provenientes de hepatectomias realizadas com o objetivo terapêutico no Serviço de Cirurgia do Aparelho Digestivo da Universidade Federal do Triângulo Mineiro. Resultados: Detectou-se que nos quatro primeiros dias de experimento 70% das células estavam com suas membranas biorrefringentes e não se coravam pela eritrosina a 2% portanto foram consideradas viáveis. Observou-se que nos três primeiros dias a viabilidade dos hepatócitos foi em média 71% no grupo EDTA e 76% na colagenase, diferença esta sem significado estatístico entre os grupos. Em nenhum momento, detectou-se diferença estatística entre os grupos. Com relação a preservação da secreção de albumina pelos hepatócitos em cultura observouse que foi mantida até o sétimo dia. Da mesma forma, notou-se que nos três primeiros dias a média de secreção de albumina de ambos os grupos foi de 50 ìg/dl e que após o quarto dia verificou-se redução da produção até o sétimo dia. Também não foi observado diferença significativa em nenhum momento entre os grupos. Conclusão: A viabilidade celular e a preservação da função de secretar albumina pelos hepatócitos são semelhantes pelas técnica do EDTA e da colagenase. Descritores: Separação Celular. Transplante de Células. Ácido Edético. -ORIGINAL ARTICLE