Apoptose e expressão de Bcl-2 e das caspases 3 e 8 em placenta bovina, em diferentes estádios de gestação

Meça, Karina K.O.L.; Martins, Alberto Mesaque; Puerto, Helen L. Del; Vasconcelos, A.C.

doi:10.1590/s0102-09352010000200003

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“…O aumento da expressão de caspase 8 ao final da gestação em células trofoblásticas mononucleadas e binucleadas é também relatado por Donovan & Cotter (2004), e reflete a ativação da via extrínseca da apoptose. Meça et al (2010) estudaram placentas bovinas em idades gestacionais de 4, 6 e 9 meses de gestação e observaram a imunoexpressão de caspase 8 nos três períodos analisados.…”

Section: Discussionunclassified

Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imunohistoquímico e morfométrico

et al. 2016

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Placental release after birth involves loss of maternal-fetal adhesion and occurs only after complete maturation of the placentoma related to the decrease in cellularity of fetal and maternal tissues. Apoptosis is required for both the normal maturation and release of the placenta after birth. The aim of this study was to evaluate the occurrence of apoptosis in samples of the placenta of cows in different stages of gestation. Samples of 15 healthy cow placentomas at 4 (n=5), 6 (n=5) and 9 (n=5) months of gestation were harvested and processed for routine histology, immunohistochemistry and histochemistry. The slides were stained with HE, PicroSirius Red and subjected to immunohistochemical analysis of proteins Caspase 3, Caspase 8, Bax and Bid. Increase in number of vessels was not associated with increase in vascular area during progression of gestation. The results of histomorphometry revealed increased labeling for Bax and Caspases 3 and 8 in trophoblastic binucleated cells in late pregnancy, where the Bid remained without significant change. Histomorphometry analyzing the mononuclear trophoblast cells showed a high expression for Bax in early pregnancy, but decreased at 6 months of gestation. Immunolabeling revealed increased Caspases 3/8 and Bid with advancing of gestation. Further evaluation of type I and III collagen showed a decrease of both types of collagens at the end of gestation, what is very important for the reduction of maternal-fetal adhesion. These results confirm that Caspases 3 and 8 and Bax are involved in the mechanisms of activation of apoptosis through mitochondrial intrinsic and/or extrinsic pathway during pregnancy in trophoblastic binucleated cells. In mononuclear trophoblast cells Bax looses importance in the apoptosis process, awhile Bid and caspases 3 and 8 become the most significant.

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Section: Discussionunclassified

Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imunohistoquímico e morfométrico

et al. 2016

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“…A reação imuno-histoquímica para caspases 3 mostrou uma marcação positiva intensamente e difusa. Evidenciando a participação das mesmas na apoptose que está ocorrendo nos três estágios gestacionais, o que confirma estudos anteriores feitos com essas mesmas amostras de placentônios, onde a PCR em tempo real demonstrou que o Bcl-2 e a caspase 3 foram expressos nos três estágios gestacionais estudados, sendo a expressão de Bcl-2 menor que a de caspase 8, que é menor que a de caspase 3, apresentando o mesmo padrão, indicando que essas enzimas estão envolvidas na via apoptótica ativada na maturação placentária, exibindo um padrão de expressão ao longo da gestação (Meça et al 2010).…”

Section: Discussionunclassified

Apoptose na maturação placentária de vacas em diferentes estágios de gestação: evidenciação imuno-histoquímica e bioquímica

et al. 2011

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Apoptose tem um papel importante na manutenção da homeostase placentária, e o desequilíbrio desse processo pode comprometer a gestação. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrencia de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentes fases de gestação. Amostras de placentomos de 15 vacas saudáveis com 4 (n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestação foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imuno-histoquímica e isolamento de DNA. As lâminas obtidas foram coradas em HE, ou submetidas à análise imuno-histoquímica das proteínas pró-apoptóticas caspase-3 e Bax, e da proteína anti-apoptótica Bcl-2. O DNA isolado foi submetido à eletroforese em gel de agarose para detecção da fragmentação internucleossômica do genoma. Os resultados de histomorfometria revelaram que as células apoptóticas aumentaram progressivamente com o avanço da gestação. Confirmou-se a apoptose pela fragmentação característica do DNA genômico, visualizada pelo clássico "padrão em escada" na eletroforese em gel de agarose. Adcionalmente, a imunoexpressão de caspase-3, Bax e Bcl-2 foram observadas em todas as amostras. Entretanto, a proteína caspase-3 apresentou marcação mais intensa em todos os tempos gestacionais, quando comparada com a marcação das proteínas Bcl-2 e Bax. Esses resultados confirmam e reforçam a importância da apoptose na maturação placentária. Além disto, indica que caspase-3, Bax e Bcl-2 estão envolvidas nos mecanismos de ativação da apoptose pela via intrínseca mitocondrial ao longo da gestação, contribuindo para o equilíbrio fisiológico da celularidade e renovação celular na placenta bovina.

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“…cDNA was obtained from the mRNA using a SuperScript IV reverse transcriptase kit (Thermo Fisher Scientific). Specific primers for interleukin 1 beta (IL-1β) [ 45 ], tumour necrosis factor alpha (TNF-α) [ 45 ], toll-like receptor 2 (TLR2) [ 45 ], TLR4 [ 45 ], inducible nitric oxide synthase (iNOS) [ 46 ], caspase-3 (Casp3) [ 47 ], and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) [ 45 ] were used in quantitative PCR to determine gene expression. The reaction was performed using a StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems, São Paulo, Brazil).…”

Section: Methodsmentioning

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Heterologous Expression, Purification, and Immunomodulatory Effects of Recombinant Lipoprotein GUDIV-103 Isolated from Ureaplasma diversum

et al. 2022

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Ureaplasma diversum is a bacterial pathogen that infects cattle and can cause severe inflammation of the genital and reproductive systems. Lipid-associated membrane proteins (LAMPs), including GUDIV-103, are the main virulence factors in this bacterium. In this study, we heterologously expressed recombinant GUDIV-103 (rGUDIV-103) in Escherichia coli, purified it, and evaluated its immunological reactivity and immunomodulatory effects in bovine peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Samples from rabbits inoculated with purified rGUDIV-103 were analysed using indirect enzyme-linked immunosorbent assay and dot blotting to confirm polyclonal antibody production and assess kinetics, respectively. The expression of this lipoprotein in field isolates was confirmed via Western blotting with anti-rGUDIV-103 serum and hydrophobic or hydrophilic proteins from 42 U. diversum strains. Moreover, the antibodies produced against the U. diversum ATCC 49783 strain recognised rGUDIV-103. The mitogenic potential of rGUDIV-103 was evaluated using a lymphoproliferation assay in 5(6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester–labelled bovine PBMCs, where it induced lymphocyte proliferation. Quantitative polymerase chain reaction analysis revealed that the expression of interleukin-1β, toll-like receptor (TLR)-α, TLR2, TLR4, inducible nitric oxide synthase, and caspase-3–encoding genes increased more in rGUDIV-103–treated PBMCs than in untreated cells (p < 0.05). Treating PBMCs with rGUDIV-103 increased nitric oxide and hydrogen peroxide levels. The antigenic and immunogenic properties of rGUDIV-103 suggested its suitability for immunobiological application.

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Apoptose e expressão de Bcl-2 e das caspases 3 e 8 em placenta bovina, em diferentes estádios de gestação

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Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imunohistoquímico e morfométrico

Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imunohistoquímico e morfométrico

Apoptose na maturação placentária de vacas em diferentes estágios de gestação: evidenciação imuno-histoquímica e bioquímica

Heterologous Expression, Purification, and Immunomodulatory Effects of Recombinant Lipoprotein GUDIV-103 Isolated from Ureaplasma diversum

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