Determinação do perfil protéico da membrana externa da Leptospira interrogans sorovariedade Hardjoprajitno

Abstract

RESUMOEstudou-se o perfil das proteínas da membrana externa (PME) da Leptospira interrogans sorovariedade Hardjoprajitno por meio da eletroforese bidimensional. Foram utilizadas técnicas de extração das PME com Triton x114 e precipitação com acetona. Os géis foram corados com nitrato de prata e as imagens analisadas para determinação da massa molecular das proteínas detectadas. INTRODUÇÃOA leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição mundial. Em animais, sua importância econômica está relacionada aos prejuízos nos sistemas de produção da pecuária leiteira e de carne, principalmente em bovinos, decorrentes dos problemas reprodutivos. Abortos e mortalidade embrionária, nascimento de bezerros fracos ou prematuros, assim como natimortalidade e mastites, são os quadros mais freqüentes (Araújo et al., 2005). A leptospirose é o resultado da relação bilateral existente entre leptospira e hospedeiro, sendo um processo dinâmico, envolvendo tanto fatores relacionados ao agente quanto ao hospedeiro (Levett, 2001). Nunes-Eduards et al. (1985) realizaram o primeiro estudo com a finalidade de verificar a composição protéica da membrana externa das leptospiras. Na investigação, utilizaram amostra de Hardjoprajitno e a técnica de marcação radioativa dos antígenos com metionina (S 35 ). Nove bandas (63; 55; 51,5; 41,5; 38; 36; 35,5; 33 e 21,5KDa) foram identificadas como componentes da membrana externa. Outros

Produção e purificação de imunoglobulinas Y policlonais anti-Leptospira spp.

“…Lafetá (2006) observou que o perfil protéico das proteínas de membrana externa da Leptospira interrogans sorovar Hardjo possui muitas similaridades com o perfil protéico da membrana externa de L. interrogans. Souza et al (2012) demonstrou que um teste ELISA utilizando PME do sorovar Hardjo apresentou sensibilidade de 100%, especificidade 73% e concordância de 83% quando comparado a Soroaglutinação Microscópica.…”

Development and standardization of the Dot Blot test for serological diagnosis of bovine leptospirosis

“…The samples positive for Canicola, Hebdomadis, Icterohemorrhagiae and tarassovi serovars according to MAT, were also positive in the Dot Blot test and not different from the samples positive only to either Hardjo or Wolffi serovars, even though only the OMPs of the Hardjo and Wolffi serovars were used in the testing. Unlike the LPS, the OMPs were preserved between different L. interrogans serovars (Faine et al, 1999;Levett, 2004), and the OMPs of the Hardjo serovar are similar to the outer membrane protein profile of other serovars (Lafetá et al, 2008).…”

“…To produce the antigen (OMP), the Hardjo and Wolffi serovars were grown in Ellinghausen -McCullough -Johnson -Harris (EMJH -DIFCO) liquid medium, supplemented with 10% sterile rabbit serum, free of anti-leptospira antibodies, and incubated for seven days at 30°C (Brasil, 1995;Magalhães et al, 2006). The OMP was extracted following the modified Lafetá et al methodology (Lafetá et al, 2008).…”

Caracterização das proteínas de superfície de membrana externa da sorovariedade Hardjo isolada de bovinos em Minas Gerais

“…Apesar de todos os soros hiperimunes terem apresentado títulos altos (dados não apresentados), o soro anti-Sponselee só reconheceu uma proteína (32,50 kDa) em todas as três amostras, o que pode indicar que mesmo apresentado perfis protéicos semelhantes, as proteínas ou a imunogenicidade das proteínas pode ser diferente entre as amostras. Lafetá et al (2008), trabalhando com géis bidimensionais e L. interrogans sorovariedade Hardjo, mostraram que várias proteínas de mesma massa molecular podem estar presentes membrana externa de L. interrogans e que estas proteínas não podem ser resolvidas em géis monodimensionais como os utilizados no presente estudo. As duas classes de proteínas reconhecidas pelos soros anti-Hardjoprajitno e antiNorma, na faixa de 35,83 kDa a 29,19 kDa, parecem se equivaler, mas ambos os soros reconhecem proteínas de alta massa molecular diferentes em todas as amostras estudadas (78,28 kDa e 102,83 kDa, respectivamente).…”