Bioensaios na detecção e quantificação de sementes de soja geneticamente modificada resistente ao glifosato

Miranda, Denise Meza De; Tillmann, Maria Ângela André; Balerini, Fábio; Villela, Francisco Amaral

doi:10.1590/s0101-31222005000100012

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“…Como em vários outros estudos sobre detecção de sementes de soja tolerante ao herbicida (Goggi andStahr, 1997, Bevilaqua et al, 2000;Torres et al, 2003;Funguetto et al, 2004;West, 2004, Cunha et al, 2005;Miranda et al, 2005), a diferença marcante entre as cultivares foi a presença e ausência de plântulas normais quando em tratamento contendo o herbicida, tanto para o bioensaio em papel umedecido (Tabelas 2 e 3), quanto para o bioensaio de pré-embebição (Tabelas 6 e 7). O princípio de ambos bioensaios consiste no fato de que o contato entre as sementes de soja convencional com a solução do herbicida (Funguetto et al, 2004;Tillmann and West, 2004;Miranda et al, 2005) resulta em plântulas anormais. Nesta situação de contato com o herbicida, sementes de uma cultivar GM resultam plântulas normais.…”

Section: Resultsunclassified

“…do herbicida nos demais tratamentos (Miranda et al, 2005). Os rolos de germinação, com 50 sementes cada, foram incubados em câmara de germinação por 7 dias, sob temperatura de 25±1 °C.…”

Section: Methodsunclassified

“…Foram simuladas, sem o conhecimento do analista, quatro níveis de contaminações: 0, 1, 3 e 5 % de sementes da cultivar GM entre sementes da cultivar convencional, conforme realizado por Miranda et al (2005). Adicionalmente, foi simulada a presença de sementes da cultivar convencional como minoria nas misturas, nas proporções de 0, 1, 3 e 5 % de contaminação na cultivar GM.…”

Section: Quantificação De Misturasunclassified

“…No que se refere à soja GM tolerante ao glifosato, bioensaios com diferentes princípios vêm sendo publicados no intuito de fornecer uma metodologia confiável para detecção de sementes de soja GM em lotes de sementes de soja não-GM. Entre os bioensaios, todos com bons resultados, podem ser citados: germinação seguida de aplicação do herbicida sobre as plantas (Goggi and Stahr, 1997); pulverização foliar com glifosato pós-germinação (Bevilaqua et al, 2000;Torres et al, 2003); umedecimento do substrato de germinação com solução do herbicida (Bevilaqua et al, 2000;Funguetto et al, 2004;Miranda et al, 2005); identificação com base na atividade de enzimas (Menezes et al, 2004); imersão de sementes em solução do herbicida (Funguetto et al, 2004;Tillmann and West, 2004); pré-embebição de sementes em substrato umedecido com glifosato (Goggi and Stahr, 1997;Funguetto et al, 2004;Tillmann and West, 2004); emergência da plântula em areia, seguida de aplicação do herbicida (Miranda et al, 2006); e, detecção em sistema hidropônico (Bertagnolli et al, 2006).…”

Section: Introductionunclassified

“…Cunha et al (2005) compararam o desempenho de diferentes bioensaios para detecção de sementes de soja GM, e concluíram sobre a alta eficiência desses métodos perante às técnicas moleculares em relação ao custo/benefício. Miranda et al (2005) e Miranda et al (2006) demonstraram a capacidade de diferentes métodos em detectar e quantificar misturas simuladas, onde os bioensaios confirmaram seu elevado potencial. Pereira et al (2007) utilizaram os bioensaios na estimativa do fluxo gênico entre uma cultivar de soja GM e uma cultivar de soja convencional sensível ao glifosato e estes bioensaios foram eficientes em possibilitar a identificação das plântulas tolerantes a este herbicida nas amostras analisadas.…”

Section: Introductionunclassified

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Ajuste de metodologias para a identificação de cultivares de soja quanto à tolerância ao glifosato

Pereira

Lisboa

Dias

et al. 2009

Rev. bras. sementes

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RESUMO -Os bioensaios constituem numa alternativa prática e eficiente para detecção de sementes de soja geneticamente modificada (GM), tolerante ao glifosato. Contudo, deve ser verificada sua utilização na identificação das sementes quando o lote é de soja GM, ou seja, quando sementes de soja convencional são a minoria. Objetivou-se com este trabalho ajustar a metodologia de dois bioensaios de detecção de sementes de soja GM e testar os melhores protocolos, um de cada bioensaio, na detecção e quantificação de misturas simuladas, contendo genótipos contrastantes quanto à tolerância ao herbicida. Nos bioensaios, foram testadas três umidades do substrato (2,0; 2,5 e 3,0 vezes o seu peso seco), cinco soluções do herbicida (0; 0,01; 0,03; 0,06 e 0,12 %) no método papel umedecido com glifosato e quatro soluções (0; 0,3; 0,6 e 1,2 %) no método pré -embebição de sementes. A umidade 3,0 e solução 0,03 % constituíram o protocolo mais eficiente para detecção no método do papel umedecido. A umidade 2,0 e solução 0,3 % se destacaram no método da pré-embebição das sementes. Foi mais prático e rápido detectar plântulas tolerantes do que plântulas sensíveis em ambos os testes. Em amostras com maior taxa de contaminação, foi mais fácil detectar e mais difícil quantificar misturas com exatidão. Os erros foram relativamente raros considerando os acertos.Termos para indexação: Glycine max, organismo geneticamente modificado, pureza genética. ADJUSTMENT OF METODOLOGYES TO VERIFICATION OF SOYBEAN CULTIVARS AS THE TOLERANCE TO THE GLYPHOSATEABSTRACT -Bioassays constitute a practical and efficient alternative for detection of genetically modified soybean seeds (GM) tolerant to gliphosate. However, their use should be analyzed in the identification of seeds when the lot is of GM soybean, in other words, when seeds of conventional soybean are the minority. The objectives of this study were to adjust the methodology of two bioassays to detect GM soybean seeds and to test the best protocols, one of each bioassay, in the detection and quantification of simulated mixtures, containing contrasting genotypes for tolerance to the herbicide. In the bioassays, the following were tested: three moistures of the substratum paper (2.0; 2.5 and 3.0 times the dry weight), five solutions (0; 0.01; 0.03; 0.06 and 0.12%) in the method moistened paper with herbicide and four solutions (0; 0.3; 0.6 and 1.2 %) in the pre-soak seed method. The moisture 3.0 and solution 0.03 % constituted the most efficient protocol for detection in the moistened paper method. The moisture 2.0 and solution 0.3 % stood out in the pre-soak seed method. It was more

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Section: Resultsunclassified

Section: Methodsunclassified

Section: Quantificação De Misturasunclassified

Section: Introductionunclassified

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Ajuste de metodologias para a identificação de cultivares de soja quanto à tolerância ao glifosato

Pereira

Lisboa

Dias

et al. 2009

Rev. bras. sementes

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Real-time PCR for traceability and quantification of genetically modified seeds in lots of non-transgenic soybean

Leão-Buchir¹,

Pereira²,

Silva³

et al. 2018

Biosci. J.

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The constant presence of genetically modified (GM) soybean in conventional seed lots has become a growing problem for international seed trade. In this context, seed companies have prompted the development of routine tests for accurate genetically modified soybean seeds detection. In this study, a quantitative PCR-based method was standardized in order to detect and quantify mixtures of seeds (i.e. certified seed) or GM grains (i.e. seeds came from field) into samples of non-GM soybean, in a way that soybean lots can be assessed within the standards established by legislation. The method involved the use of p35S-f2/petu-r1 primers targeting CP-4 enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (cp4-epsps) gene (i.e. that confers herbicide tolerance in Roundup Ready TM (RR)) for real-time PCR detection and quantification through mericon Quant GMO Detection Assay. The results revealed the method efficiency to detect and quantify the presence of even one soybean seed in batch used for routine evaluation of GM seeds. In addition, it was possible to detect of up to 0.1% of transgenic DNA relative to the soybean grains content. Thus, the sensitive GMO quantitative approach described in this study will provide support in supervising activities, and facilitate the process and control of GM soybean.

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Fluxo gênico em soja geneticamente modificada e método para sua detecção

Pereira

Giúdice

Carneiro

et al. 2007

Pesq. agropec. bras.

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Resumo -O objetivo deste trabalho foi avaliar métodos para detecção de sementes de soja tolerante ao glifosato e o fluxo gênico de uma cultivar transgênica para uma convencional, em Florestal e Viçosa, MG. Para adequar método de detecção, foi conduzido experimento comparativo entre cinco bioensaios, dos quais se destacou o teste de germinação em substrato umedecido com solução do glifosato. O experimento de fluxo gênico foi instalado em campo, no esquema de quadrados concêntricos. No centro, foi plantada a cultivar tolerante ao glifosato (fonte de pólen). À sua volta, foi semeada a cultivar sensível (receptora do pólen). No estádio R8, foram colhidas sementes das laterais dos quadrados, em distâncias variadas da fonte de pólen: 0,5, 1, 2, 4 e 8 m. Amostras de 900 sementes, por fileira, foram avaliadas pelo teste de germinação em substrato umedecido com solução de glifosato a 0,06%. Plântulas tolerantes ao glifosato indicaram fecundação cruzada. As maiores porcentagens de hibridação -1,27% em Florestal e 0,25% em Viçosa -ocorreram a 0,5 m de distância, entre fonte e receptor de pólen, e essas taxas aproximaram-se de zero às distâncias de 2,26 e 1,16 m, para Florestal e Viçosa, respectivamente.Termos para indexação: Glycine max, polinização cruzada, organismo geneticamente modificado. Gene flow in genetically modified soybean and method for its detectionAbstract -The objective of this work was to assess the methods for detection of glyphosate tolerance soybean seeds and the gene flow from a genetically modified soybean cultivar to a conventional one, in Viçosa and Florestal, MG, Brazil. In order to assess the method for detection, a comparative experiment was conduct among five bioassays, from which the germination test in moistened substrate with glyphosate solution was outstanding. The experiment of gene flow was installed in field, in the concentric squares design. In the center, the glyphosatetolerant cultivar (pollen source) was planted. Around it, the sensitive cultivar (pollen receptor) was sowed. In the stage R8, seeds of lateral of the squares were harvested, in various distances from the pollen source: 0.5, 1, 2, 4 and 8 m. Samples of 900 seeds by row were evaluated, using the germination test in moistened substrate with a solution of glyphosate at 0.06%. Glyphosate-tolerant seedlings indicated cross-pollination. The largest hybridization rates -1.27% in Florestal, and 0.25% in Viçosa -ocurred at 0.5 m distance between source and pollen receiver, and these rates reached zero at 2.26 and 1.16 m distances, in Florestal and Viçosa, respectively.

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Bioensaios na detecção e quantificação de sementes de soja geneticamente modificada resistente ao glifosato

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Ajuste de metodologias para a identificação de cultivares de soja quanto à tolerância ao glifosato

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Fluxo gênico em soja geneticamente modificada e método para sua detecção

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