Purificação parcial, por dois diferentes métodos cromatográficos, da lipase produzida por Rhizopus sp.

Abstract

-INTRODUÇÃOLipases, triacilglicerol éster hidrolases (EC 3.1.1.3), são enzimas largamente distribuídas na natureza, que catalisam a hidrólise de óleos e gorduras liberando áci-dos graxos livres, diacilgliceróis, monoacilgliceróis e glicerol [1]. Estas enzimas, encontradas em tecidos animais, vegetais e em microrganismos, têm papel fundamental no metabolismo de lipídios destes seres vivos: como enzimas digestivas, na deposição e mobilização dos tecidos de reserva energética e no metabolismo intracelular, atuando sobre as membranas celulares [13].Os aspectos biológicos, fisiológicos e a aplicação industrial de enzimas lipolíticas têm sido bastante estudados e, nos últimos anos, a pesquisa sobre lipases tem sido intensificada devido principalmente a três motivos:• RESUMOLipases, especialmente as de origem microbiana, são largamente utilizadas em processos e na obtenção de produtos para as indústrias química, cosmética, farmacêutica e alimentícia. A produção de enzimas de elevada pureza é importante, principalmente, do ponto de vista do controle dos processos (ausência de interferentes), porém as etapas necessárias à purificação, em geral, provocam perdas na atividade das enzimas e aumentam seu custo final. O objetivo deste trabalho foi propor a melhor metodologia de purificação para a lipase de Rhizopus sp. através do teste de dois diferentes métodos cromatográficos (troca iônica e interação hidrofóbica) e, ainda verificar o melhor planejamento estatístico para caracterização bioquímica da mesma. Foi possível purificar parcialmente a lipase de Rhizopus sp. com o uso de coluna de DEAE Sepharose (troca aniônica) e de FENIL Sepharose (interação hidrofóbica). A primeira, embora mais seletiva para a enzima em questão, parece provocar redução de sua atividade. A presença de maiores concentrações de íons Na +1 na fração purificada por FENIL Sepharose parece contribuir para o aumento de atividade da lipase. Embora os resultados obtidos por análise multivariável para determinação das características bioquímicas da lipase sejam compatíveis com a análise univariável, aquele planejamento não foi considerado indicado no presente caso. Palavras-chave: troca iônica; DEAE Sepharose; interação hidrofóbica; Fenil Sepharose; caracterização bioquímica. SUMMARYPARTIAL PURIFICATION OF THE LIPASE FROM Rhizopus sp BY TWO DIFFERENT CHROMATOGRAPHIC METHODS. Lipases, especially of microbial origin, are widely applied in processes and in the production of insumes for the chemical, cosmetic, pharmaceutical and food industries. To produce highly pure enzyme is important to process control (absence of interferentes). However the necessary stages to the purification, in general, cause losses of activity and increases enzyme final cost. The aim of this work was to consider the best methodology of purification for the Rhizopus sp. lipase through the test of two different chromatographic methods (ion exchange and hydrophobic interaction) and also to verify the best statistical design for the biochemical characterization of the enzyme. It was possib...

Obtenção de Lipases Microbianas: Uma Breve Revisão

“…Koblitz e Pastore [89] avaliando a utilização de cromatografia de troca iônica e de interação hidrofóbica para purificação de lipase de Rhizopus sp. observaram um fator de purificação de 3,9 e 6,8 , respectivamente.…”

Glicerólise de óleo de peixe catalisada por lipase comercial de Rhizomucor miehei em meio com surfactante de grau alimentício

“…Logo, o uso de enzimas possibilita baixo custo energético, maior seletividade e menos resíduos ao final do processo, obtendo-se, assim, produtos de qualidade superior. 3 Atualmente, tem sido dada muita ênfase à necessidade de agregar propriedades funcionais aos alimentos ingeridos pelo homem. Com o consumo demasiado de alimentos industrializados, observou-se, em diversos países ocidentais, uma desproporção na ingestão média recomendada de ácidos graxos ômega-6 e ômega-3.…”

Caracterização funcional e estrutural de enzimas lipolíticas de um consórcio microbiano degradador de óleo diesel.

“…However, this situation has the potential to change due to recent advances in technology, such as genetic engineering as well as protein modification and immobilization (KOBLITZ;PASTORE, 2004;SAXENA et al 2003).…”