Apoptose na maturação placentária de vacas em diferentes estágios de gestação: evidenciação imuno-histoquímica e bioquímica

Abstract

Apoptose tem um papel importante na manutenção da homeostase placentária, e o desequilíbrio desse processo pode comprometer a gestação. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrencia de apoptose em amostras de placenta de vacas em diferentes fases de gestação. Amostras de placentomos de 15 vacas saudáveis com 4 (n=5), 6 (n=5) e 9 (n=5) meses de gestação foram colhidas e processadas rotineiramente para a histologia, imuno-histoquímica e isolamento de DNA. As lâminas obtidas foram coradas em HE, ou submetidas à análise imuno-histoquímica das proteínas pró-apoptóticas caspase-3 e Bax, e da proteína anti-apoptótica Bcl-2. O DNA isolado foi submetido à eletroforese em gel de agarose para detecção da fragmentação internucleossômica do genoma. Os resultados de histomorfometria revelaram que as células apoptóticas aumentaram progressivamente com o avanço da gestação. Confirmou-se a apoptose pela fragmentação característica do DNA genômico, visualizada pelo clássico "padrão em escada" na eletroforese em gel de agarose. Adcionalmente, a imunoexpressão de caspase-3, Bax e Bcl-2 foram observadas em todas as amostras. Entretanto, a proteína caspase-3 apresentou marcação mais intensa em todos os tempos gestacionais, quando comparada com a marcação das proteínas Bcl-2 e Bax. Esses resultados confirmam e reforçam a importância da apoptose na maturação placentária. Além disto, indica que caspase-3, Bax e Bcl-2 estão envolvidas nos mecanismos de ativação da apoptose pela via intrínseca mitocondrial ao longo da gestação, contribuindo para o equilíbrio fisiológico da celularidade e renovação celular na placenta bovina.

DNA analysis of cattle parasitic protozoan Tritrichomonas foetus after photodynamic therapy

“…The last cleavage occurs when an activated nuclease cleaves the DNA at linker sites between nucleosomes, resulting in fragments that are multimers of 180-200 bp [41]. The presence of LMW fragments is a typical picture of apoptosis in various cell systems [42][43][44][45][46][47][48]. It is important to mention that the DNA damage caused by PDT is related to the treatment dose, length, etc., and that the resulting DNA fragmentation does not necessarily lead to cell death.…”

“…1A). Although the formation of the DNA ladder is, in fact, the end point of DNA degradation and does not reflect the full DNA fragmentation pattern occurring during apoptosis, it is known that it is preceded by rosette cleavage and the 50-kb rosette component, in turn, is preceded by the formation of HMW DNA fragments, which are considered to be the most reliable biochemical markers for initial apoptosis [48].…”

“…It has been adapted for use with various eukaryotic cells, including animal, plant, yeast, algae [59][60][61], and protozoan (Tetrahymena thermophile) cells [62]. In cases of apoptotic cell death, the comet-like structures present large tails and small heads, defined as cells in which more than 90% of the nucleus DNA migrated to the tail [48,63]. Differently from viable cells, which display a large head with only a minute tail, and necrotic cells, which display large nuclear remnants and almost invisible tails [48].…”

“…In cases of apoptotic cell death, the comet-like structures present large tails and small heads, defined as cells in which more than 90% of the nucleus DNA migrated to the tail [48,63]. Differently from viable cells, which display a large head with only a minute tail, and necrotic cells, which display large nuclear remnants and almost invisible tails [48]. After the PDT treatment of T. foetus, it was possible to observe that more nuclear DNA was fragmented and formed the comet tail characteristic of apoptosis (Fig.…”

Apoptose e maturação placentária bovina: um estudo imunohistoquímico e morfométrico

“…A deoxyribonuclease ativada pela caspase cliva o DNA inespecificamente em fragmentos de aproximadamente 200 pares de bases matando as célu-las (Straszewski-Chavez et al 2005). O aumento do índice apoptótico em placentomas com o avanço da idade gestacional em vacas foi comprovado morfologicamente com a reação de Tunel por Meça et al (2011).…”