Evaluation of a recombinant p24 antigen for the detection of Feline Immunodeficiency Virus-specific antibodies

Abstract

RESUMO.-[Avaliação do antígeno recombinante p24 para a detecção de anticorpos específicos do Vírus da Imunodeficiência Felina.] O vírus da imunodeficiência felina tem distribuição mundial e é considerado um patógeno significativo. No Brasil, a prática diagnóstica é baseada principalmente em teste rápidos, importados e de custo elevado, disponíveis comercialmente. Devido ao seu custo proibitivo em nosso país, o diagnóstico da infecção pelo FIV é raramente realizado. Ademais, os lentivírus se multiplicam lenta e pobremente em cultura de células, o que torna a produção de antígeno por meios clássicos e o estabelecimento do imunodiagnóstico impraticável. Com o objetivo de lidar com esta questão, técnicas de DNA recombinante foram utilizadas para produção de um antígeno do capsídeo viral, a proteína p24. A avaliação da reatividade realizada por Western blot indicou que este antígeno recombinante pode ser útil para o imunodiagnóstico de infecções pelo FIV. TERMOS DE INDEXAÇÃO: FIV, vírus da imunodeficiência felina, gatos. INTRODUCTIONFeline Immunodeficiency Virus (FIV) is a lentivirus that causes a chronic and progressive immunodeficiency and is considered one of the main pathogens of domestic felines. Infected cats show a progressive depletion of CD4+ Tlymphocytes and immunological deficits which, after a long asymptomatic period, may lead to severe opportunistic infections followed by death, characterizing the clinical phase known as Feline Acquired Immunodeficiency Syndrome (FAIDS). Due to the similarity to HIV, FIV-infected cats have been used as experimental models for HIV/AIDS (De Rozieres et al. 2004).FIV is structured like other lentiviruses. Virions measure 80-100 nm in diameter and consist of an envelope, a nucleocapsid, a nucleoid and a matrix protein.

Developing a Feline Immunodeficiency Virus Subtype B Vaccine Prototype Using a Recombinant MVA Vector

“…After 48 h, cell monolayers were collected, and whole cell proteins were extracted [ 20 ]; uninfected BHK-21 cells were used as mock controls, and a recombinant FIV p24 protein was used as a positive control. A sera pool of five FIV + animals was used to perform western blot, as previously described [ 21 ].…”

ELISA r-p24: optimization and validation of an enzyme immunoassay for the diagnosis of Feline Immunodeficiency Virus infections

“…The expression and purification of r-p24 protein from bacterial biomass followed the protocol described by Mazur et al (2010). Briefly, the recombinant plasmid DNA was transformed by electroporation in One Shot  BL21 Star™ cells (Invitrogen) and the DNA/bacteria mixture was spread and incubated overnight at 37°C in solid Luria Broth (LB) with ampicillin at 100mg/mL.…”

Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune inato das aves

“…A produção de amplicons de 209 pares de bases para esses genes de ambas as cepas foi devido à possibilidade de utilizar esses clones para procedimentos de expressão heteróloga dos fragmentos genéticos de tamanhos reduzidos e futuramente avaliar o potencial de pequenos peptídeos recombinantes estimularem o sistema imune inato das aves. Mazur et al (2010) realizaram a clonagem do antígeno p24 do capsídeo do vírus da imunodeficiência felina com adoção do pET100/D-TOPO. Esses pesquisadores adotaram as mesmas especificações utilizadas nesse presente trabalho para a geração de produtos de PCR com extremidades coesivas, como a adição CACC nos iniciadores forward e utilização da DNA polimerase de alta fidelidade, que posteriormente permitiu a inserção desses fragmentos na orientação correta nos plasmídeos.…”

“…Esses pesquisadores adotaram as mesmas especificações utilizadas nesse presente trabalho para a geração de produtos de PCR com extremidades coesivas, como a adição CACC nos iniciadores forward e utilização da DNA polimerase de alta fidelidade, que posteriormente permitiu a inserção desses fragmentos na orientação correta nos plasmídeos. Como referido por Mazur et al (2010), a adoção desse sistema de clonagem é viável para a produção de proteínas recombinantes uma vez que os plasmídeos confirmados com as sequências podem ser inseridas em E. coli de expressão por metodologia simples e custo viável. Portanto, no presente trabalho, foi utilizado esse sistema visando objetivos futuros de gerar produtos imunobiológicos que possam ser produzidos de forma recombinante em escala industrial.…”