Detecção molecular de herpesvírus bovino 1 e 5 em amostras de encéfalo conservadas em formol e emblocadas em parafina provenientes de bovinos com doença neurológica

Abstract

A infecção por herpesvírus bovino (BoHV) é uma das principais causas de doença neurológica em bovinos na região Centro-Oeste do Brasil. O uso de técnicas moleculares de diagnóstico representa uma contribuição importante para o estudo dessa doença. Este trabalho descreve o uso de uma técnica específica de PCR multiplex para identificar BoHV-5 e BoHV-1 em 76 amostras de encéfalo de bovinos fixadas em formol e incluídas em parafina. Com base nas alterações histológicas, as amostras foram separadas em 2 grupos: o Grupo 1 era composto de 40 amostras de bovinos com meningoencefalite necrosante característica da infecção por BoHV; no Grupo 2 estavam 36 amostras de casos com encefalite não-supurativa inespecífica. Identificação de BoHV-5 foi constatada em 40% das amostras do grupo 1 e em 33% das amostras do grupo 2. Não houve amplificação de DNA de BoHV-1 em nenhuma amostra.

Caracterização etiológica, epidemiológica e clínico-patológica da meningoencefalite por herpesvírus bovino em bovinos no Estado de Goiás

“…Esses agentes estão associados a várias manifestações clínicas que incluem rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), vulvovaginite pustular, balanopostite pustular, abortos, conjuntivite, forma sistêmica neonatal e meningoencefalite (Franco & Roehe 2007. Geralmente, a forma neurológica é atribuída ao BoHV-5, enquanto que as demais manifestações costumam ser causadas pelo BoHV-1 (Ely et al 1996, Silva et al 2007, Arruda et al 2010, porém ambos podem causar doença neurológica de difícil diferenciação clínica, sendo importante a aplicação de técnicas moleculares como a reação em cadeia de polimerase (PCR) (Lunardi et al 2009). Em um trabalho realizado no Sul do Brasil, constatou-se que casos de meningoencefalite herpética bovina foram causados por ambos BoHV-1 e BoHV-5 (Rissi et al 2008).…”

“…A meningoencefalite tem sido observada em várias regiões do mundo e, no Brasil, surtos de rinotraqueíte, vulvovaginite e balanopostite são diagnosticados em várias regiões do país. A meningoencefalite associada ao BoHV-5 é uma doença infecto-contagiosa que afeta principalmente bovinos jovens e têm sido reportada em vários estados brasileiros, como Rio Grande do Sul (Riet-Correa et al 1989, Sanches et al 2000, Elias et al 2004, Rissi et al 2006, Silva et al 2007, Rissi & Barros 2013, Paraná (Claus et al 2007, Lunardi et al 2009, Massitel et al 2016, Rio de Janeiro, Minas Gerais (Gomes et al 2002, Claus et al 2007, Franco & Roehe 2007, Aquino Neto et al 2009, Mato Grosso (Colodel et al 2002, Claus et al 2007, Arruda et al 2010, Pernambuco (Oliveira et al 2014), Paraíba, Rio Grande do Norte (Galiza et al 2010), Pará (Riet-Correa et al 2006, São Paulo (Claus et al 2007, Ferrari et al 2007, Cunha et al 2009 e Mato Grosso do Sul (Salvador et al 1998, Gomes et al 2002, Lemos 2005, Claus et al 2007, Silva et al 2007. Em Goiás, a doença é pouco estudada (De Paula et al 2005, Silva 2014) e dois surtos neurológicos da doença foram diagnosticados na região Sudoeste do Estado (Freitas Neto et al 2010).…”

Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves

“…Similar studies with experimentally infected calves using DNA extracted from formalin-fixed, paraffin-embedded brain tissue detected 32.8% (Arruda et al 2010), 33.3% (Pedraza et al 2010) 66.6% (Gomes et al 2002), 75% (Ferrari et al 2007) and 87.5% (Ely et al 1996) of the positive animals using PCR, multiplex PCR, or nested PCR. Similar to our results, but using DNA extracted from frozen tissue, 100% of the BHV-5-positive animals using semi-nested PCR (Claus et al 2005) and PCR (Isernhagen et al 2011) were reported.…”

Retrospective study of Bovine herpesvirus 5 meningoencephalitis in cattle from São Paulo State, Brazil

“…Previous studies reported that primary histological lesions of BoHV-5 encephalitis are non-suppurative meningoencephalitis with mononuclear perivascular cuffs, cerebrocortical necrosis, oedema, congestion, haemorrhage, focal to diffuse gliosis, and neuronophagia (Rissi et al, 2006;Arruda et al, 2010;Cagnini et al, 2015). Similar lesions were found in the present study in all BoHV-5 PCR positive animals, although inclusion bodies were not observed in 9 positive cases.…”

“…According to Karlsen et al (1994), the fixation time causes DNA degradation and compromises the PCR results. Arruda et al (2010) demonstrated that samples stored for more than 40 days in formalin had less PCRpositive results than samples stored for less than 40 days in formalin or frozen. Moreover, PCRnegative results may occur due to other factors, such as insufficient or absent viral DNA in the tissue, poor DNA extraction and the size of the amplified product in the FFPE samples (Arruda et al, 2010;Jacobs, 2012).…”