Análise de ácidos graxos não-esterificados de plasma humano por cromatografia gasosa capilar com injeção sem divisão de fluxo

Abstract

Recebido em 3/6/03; aceito em 18/11/03; publicado na web em 27/05/04 ANALYSIS OF NON-ESTERIFIED FATTY ACIDS IN HUMAN PLASMA BY CAPILLARY GAS-CHROMATOGRAPHY WITH SPLITLESS INJECTION. The aim of the present work was to test the combination of non-esterified fatty acid (NEFA) isolation using fumed silicon dioxide with capillary gas-chromatography (C-GC) with splitless injection for the analysis of NEFAs in human plasma. Injection volume, solvent re-condensation and split purge flow-rate were the parameters evaluated for the analysis of fatty acid methyl esters by C-GC. The use of a solvent re-condensation technique, associated with 1.0 µL injection and a split purge flow rate of 80 mL/min resulted in satisfactory analysis of NEFAs. Fourteen fatty acids were identified in plasma samples, ranging from 2.03 to 184.0 µmol/L. The combination of both techniques proved useful for routine analyses of plasma NEFAs.Keywords: non-esterified fatty acids; capillary gas-chromatography with splitless injection; fumed silicon dioxide. INTRODUÇÃOOs ácidos graxos desempenham importantes funções na fisiologia humana, tais como de substrato energético e na estrutura de membranas celulares 1 . Quando mobilizados do tecido adiposo, os ácidos graxos são transportados no plasma sanguíneo sob a forma não esterificada (ácidos graxos não-esterificados, AGNE), associados à albumina plasmática. Durante o jejum, o tecido adiposo sofre maior mobilização e os AGNE passam a ser o principal substrato energético para o organismo. Sua concentração plasmática total varia de 300 a 2000 µmol/L, no período alimentado e no jejum, respectivamente 1 . Para a determinação da composição dos AGNE é necessário primeiramente separá-los das demais classes de lipídios plasmáticos (triacilgliceróis, fosfolipídios, ésteres de colesterol, dentre outras). O método clássico usado para a separação das diferentes classes de lipídios é a cromatografia em camada delgada que, entretanto, apresenta algumas desvantagens, como elevado tempo de análise e potencial risco de oxidação dos ácidos graxos poli-insaturados 2 . Outros métodos de separação ou isolamento dos AGNE incluem a cromatografia em coluna 3 e a separação em cartuchos de extração em fase sólida 4 . Entretanto, o preparo das colunas é trabalhoso e a reprodutibilidade dos resultados é dependente da habilidade no seu preparo. Já os cartuchos de extração em fase sólida disponíveis comercialmente apresentam custo relativamente elevado para análises de rotina. No método descrito por Polette et al. 5, os AGNE são separados das demais classes de lipídios plasmáticos pelo uso do dióxido de silício fundido ("fumed silicon dioxide", DSF) como agente delipidante. Após agitação do plasma com o DSF, forma-se um gel denso no qual as lipoproteínas são aprisionadas, enquanto os AGNE associados à albumina plasmática permanecem em solução na fase aquosa, que é facilmente separada por centrifugação. Este método, além de ser relativamente rápido e de baixo custo, melhora a recuperação dos analitos, quando comparado à cromatografia em ...

Polyunsaturated fatty acids and conjugated linoleic acid isomers in breast milk are associated with plasma non-esterified and erythrocyte membrane fatty acid composition in lactating women

“…Samples (1•5 ml) were injected in the gas-chromatograph, operated as follows: He gas was used as a carrier (70 kPa); the detector temperature was set at 2708C; the injector temperature was 2408C; the split ratio was 1:15; column temperature gradient was set at 2008C (held for 10 min) þ1•58C/min to 2108C (held for 20 min). NEFA were analysed by the method described in Ney et al (2004), adapted from Polette et al (1992) for splitless injections.…”

Desenvolvimento de um método para determinação de ácidos graxos em meios biológicos utilizando a espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier

“…O ácido palmítico é um ácido graxo saturado de cadeia longa formado por 16 carbonos cuja formula química é CH 3 (CH 2 ) 14 COOH. O mesmo foi escolhido como padrão no presente estudo visto que é o ácido graxo em maior concentração no plasma sanguíneo e também em muitos outros meios biológicos ou alimentos (CURI et al, 2002;NEY;TORRES;TRUGO, 2004).…”

Evaluation of lipid extraction and fatty acid composition of human plasma

“…Some authors analyzed nonesterified fatty acids and compared two methods to determine fatty acid concentrations; one using solvent extraction followed by esterification and the other by direct esterification. (7,8) However, none of these studies compared the different methods of lipid extraction. This is the most critical step in the analysis of lipid content; it can present problems such as low recovery and fatty acid oxidation, which affect the results and consequently, the analysis of fatty acid composition, especially of polyunsaturated fatty acids (PUFA), such as the omega-3 (n-3) and omega-6 (n-6) series.…”