Comparative Analysis by Polymerase Chain Reaction Amplified Minicircles of Kinetoplast DNA of a Stable Strain of Trypanosoma cruzi from São Felipe, Bahia, its Clones and Subclones: Possibility of Predominance of a Principal Clone in this Area

Campos, Regina Helena de Freitas; Gonçalves, Marilda de Souza; Reis, Eliana A. G.; Reis, Mitermayer Galvão dos; Andrade, Sônia Gumes

doi:10.1590/s0074-02761999000100009

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“…El inoculo utilizado fue de 800.000 tripomastigotes de cada clon, tanto en las infecciones individuales como en la mixta. Para determinar la presencia de parásitos en sangre, al séptimo día de infección se revisaron los ratones por el método del microhematocrito y se tomó una muestra de sangre de la cola de los ratones infectados con la mezcla de los clones en un trozo de tela para su posterior análisis por PCR (26). Para determinar la presencia de los clones en órganos, se sacrificaron grupos de tres ratones de cada infección y se les extrajo corazón, hígado, bazo, recto y músculo esquelético tomado del fémur de cada ratón.…”

Section: Infección Experimental De Ratonesunclassified

“…La obtención del ADN de la tela impregnada con sangre de los ratones se hizo por el método de Chelex®, que consiste en adicionar a la sangre una resina y someterla a altas temperaturas que liberan el ADN en el sobrenadante (26). El ADN de los órganos fue extraído por el método de fenolcloroformo-alcohol isoamilico (25:24:1), previa homogenización en solución de digestión (SDS 10%, NaCl 5 M, EDTA 0,5M, Tris-HCL 1M pH 7,5) y proteinasa K (100mg/ml), con posterior precipitación con etanol (27).…”

Section: Extracción Del Adnunclassified

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Caracterización biológica y genética de dos clones pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi de Colombia

Botero¹,

Mejía²,

Triana³

2007

biomedica

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Introducción. T. cruzi I y T. cruzi II son grupos genéticamente diferentes y se cree que dicha variabilidad es determinante del tropismo tisular en el hospedero vertebrado y responsable de las diversas manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas. Objetivo. Caracterizar biológica y genéticamente dos clones colombianos de los grupos T. cruzi I y II en el modelo murino. Materiales y métodos. Las cepas CAS15 y AF1 pertenecientes a los grupos T. cruzi I y II fueron clonadas en medio semisólido. Un clon de cada una de ellas y una mezcla de ambos se utilizaron para infectar ratones, los cuales se sacrificaron a diferentes tiempos post-infección. Para analizar la presencia del parásito en sangre y diferentes órganos, se utilizaron el microhematocrito y la reacción en cadena de la polimerasa con los marcadores de la secuencia satélite del ADN nuclear y con el espaciador intergénico del gen mini-exón. Resultados. El clon T. cruzi I fue más infectivo, observándose un tropismo preferencial por corazón, recto y músculo esquelético, mientras que el clon T. cruzi II presentó un tropismo preferencial por bazo e hígado. Durante la infección con la mezcla de los clones, se observó que el clon T. cruzi I predominó sobre el T. cruzi II tanto en sangre como en órganos. Conclusiones. Los resultados confirman que las diferencias genéticas entre los grupos de T. cruzi podrían estar determinando el tropismo tisular y de esta manera jugar un papel fundamental en el entendimiento de las manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas en Colombia.Palabras claves: Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chagas, variación (Genética), tropismo. Biological and genetic characterization of two Colombian clones of Trypanosoma cruzi groups I and IIIntroduction. Genetic differences between T. cruzi I and T. cruzi II may determine differences in their tissue tropism in the vertebrate host and may also be responsible for the differences in clinical manifestations of Chagas disease. Objective. Two Colombian clones of the T. cruzi groups I and II were characterized biologically and genetically in a murine model. Materials and methods. Strains Cas15 and AF1 belonging to the T. cruzi groups I and II were cloned in semisolid medium. A clone of each strain and a mix of both were used to infect mice; the mice were subsequently sacrificed at selected post-infection intervals. In order to identify the parasite presence in blood and organs, two methods were used (a) microhematocrit and (b) polymerase chain reaction with primers for satellite DNA and the intergenic region of miniexon. Results. The T. cruzi I clone was more infectious, with a preferential tropism observed in heart, rectum and skeletal muscle, whereas clone T. cruzi II exhibited a preferential tropism for spleen and liver. During the infection with the clone mixture a predominance of the T. cruzi I clone over clone II in blood as well as in organs was observed. Conclusion. The results corroborate that the genetic differences between the T. cruzi groups correlate with their tissue tropism, an...

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Section: Infección Experimental De Ratonesunclassified

Section: Extracción Del Adnunclassified

Caracterización biológica y genética de dos clones pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi de Colombia

Botero¹,

Mejía²,

Triana³

2007

biomedica

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“…Sin embargo, en estudios recientes se ha podido establecer que las poblaciones multiclonales que infectan un individuo, tienen clones con tropismo específico a diferentes tejidos y es exactamente la distribución de estos clones lo que puede influir o determinar el curso clínico de cada paciente (14). También se ha observado que los clones predominantes en las cepas pueden ser los responsables del tropismo preferencial hacia órganos y tejidos específicos, y esto podría contribuir a diferentes patrones de manifestación clínico-patológica en un área geográfica determinada (15), lo que se conoce como el modelo histotrópico clonal de la enfermedad de Chagas (16).…”

unclassified

Análisis por LSSP-PCR de la variabilidad genética de Trypanosoma cruzi en sangre y órganos de ratones.

Mejía

Triana

2005

biomedica

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Introducción. La enfermedad de Chagas, causada por Trypanosoma cruzi, presenta un curso clínico variable que oscila desde casos asintomáticos a casos crónicos. T. cruzi tiene una estructura clonal y las cepas infectivas son a menudo multiclonales. La variabilidad genética de T. cruzi puede ser un determinante para el tropismo diferencial a tejidos y, consecuentemente, para las formas clínicas de la enfermedad. Objetivo. Caracterizar genéticamente los parásitos de sangre y órganos de ratones infectados con dos cepas colombianas de T. cruzi. Materiales y métodos. Se infectaron ratones con dos cepas colombianas de T. cruzi con el fin de determinar la infección en sangre y órganos. Para esto, se evaluó la sensibilidad de tres marcadores moleculares diferentes, y se determinó la variabilidad genética de los clones por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa de baja astringencia con un único iniciador específico (LSSP-PCR), utilizando el marcador del ADN del cinetoplasto (kADN). Los perfiles de bandas obtenidos con la LSSP-PCR se analizaron por el método de neighbor-joining. Resultados y conclusiones. Nuestros resultados confirmaron la presencia de los dos grupos de T. cruzi en las cepas y el carácter policlonal de éstas. El marcador más sensible fue el kADN y el órgano más afectado, el corazón. Se encontraron diferencias genéticas entre los clones presentes en la sangre y los órganos de los ratones infectados. En conclusión, estos resultados apoyan el uso de la LSSP-PCR para el entendimiento de la epidemiología de la enfermedad de Chagas. Palabras clave: Trypanosoma cruzi, variación genética, LSSP-PCR, ADN del cinetoplasto, Enfermedad de ChagaGenetic variability of Trypanosoma cruzi in blood and organs of infected mice determined by LSSP-PCR Background. Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, has a variable clinical course, ranging from asymptomatic infection to chronic disease. Trypanosoma cruzi has a clonal population structure, although infecting strains are often multiclonal. Genetic variability of T. cruzi may be one of the determinant factors in differential tissue tropism and consequently of the clinical forms of the disease. Objective. To examine this possibility, mice were infected with two Colombian T. cruzi strains to determine the distribution of genetic variants in blood and organs. The sensitivity of three molecular markers was evaluated, and the genetic variability of the clones was determined. The latter was attained by means of low-stringency single specific primer polymerase chain reaction (LSSP-PCR) using a kinetoplast DNA (kDNA) marker. The kDNA signatures obtained with the LSSP-PCR were analyzed by neighbor-joining. Results and conclusion. The presence of the two lineages of T. cruzi was confirmed, as well as the multiclonal character of the two strains. The most sensitive marker was the kDNA. The most affected organ was the heart, which showed the greatest number of positive results with the three markers. Genetic differences were noted between the clones from the blood and organs...

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“…Biological and isoenzymic characters of the isolated clones reproduced the patterns of the parental strain 7 . Molecular characterization of the clones isolated from the 21SF strain has been performed by the restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the kDNA 8 . A high percentage of genetic similarity has been demonstrated for the parental strain and its clones (67 to 100%, for restriction endonuclease Rsa I and 83 to 100% for Hinf I), although a low degree of divergence has been observed.…”

mentioning

confidence: 99%

“…Considering the above results, it is important to investigate the responses to chemotherapy of clonal populations of the 21SF strain, to clarify whether the variable response to chemotherapy, already demonstrated between the various strains classified as biodeme Type II, corresponds to differences in the susceptibility of its clones. It is important to investigate if there is any relation between resistance to chemotherapy and clonal constitution, taking into account not only the similarities observed, but also the dissimilarities that have been detected in some clones 8 .…”

mentioning

confidence: 99%

Response to chemotherapy with benznidazole of clones isolated from the 21SF strain of Trypanosoma cruzi (biodeme Type II, Trypanosoma cruzi II)

Campos

Guerreiro

Sobral

et al. 2005

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

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Comparative Analysis by Polymerase Chain Reaction Amplified Minicircles of Kinetoplast DNA of a Stable Strain of Trypanosoma cruzi from São Felipe, Bahia, its Clones and Subclones: Possibility of Predominance of a Principal Clone in this Area

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Caracterización biológica y genética de dos clones pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi de Colombia

Caracterización biológica y genética de dos clones pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi de Colombia

Análisis por LSSP-PCR de la variabilidad genética de Trypanosoma cruzi en sangre y órganos de ratones.

Response to chemotherapy with benznidazole of clones isolated from the 21SF strain of Trypanosoma cruzi (biodeme Type II, Trypanosoma cruzi II)

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