БИОСИНТЕЗ БРАЗЗЕИНА В БАКТЕРИАЛЬНОЙ СИСТЕМЕ БЕСКЛЕТОЧНОГО СИНТЕЗА БЕЛКААннотация. В настоящем исследовании в качестве варианта, альтернативного каноническому глубинному культивированию в ферментере, была изучена возможность синтеза сладкого растительного белка браззеина в бактериальной системе бесклеточного синтеза белка (БСБ). Для синтеза этого фермента использовали S30-клеточный экстракт Escherichia coli, химерную РНК-полимеразу бактериофага Т7 и высококопийный плазмидный вектор pET42mut со встроенным в него геном браззеина. В результате выполнения работы впервые продемонстрирована возможность синтеза сладкого белка в системе БСБ. При этом объемный выход браззеина в оптимизированных условиях проведения процесса составил 2 мг/мл реакционой смеси, что в 57 раз больше, чем максимальный выход его в ранее описанных в литературе экспериментах с использованием цельноклеточных систем экспрессии.
One of the recent perspective trends of molecular biotechnology is cell-free protein synthesis (CFPS). The procedure of CFPS is based on in vitro reconstruction of all stages of a biosynthesis of protein in a whole cell, including a transcription, an aminoacylation of tRNA and translation of mRNA by ribosomes.Previously, we constructed a strain Escherichia coli that produces homologous adenosine deaminase (ADase). In the present study, as an alternative to canonical submerged cultivation in a fermenter, the possibility of the ADase synthesis in the system of CFPS was studied. For synthesis of this enzyme we used the E. coli-30 cell extract, T7 bacteriophage RNA polymerase, and high-copy plasmid vector pET42mut with gene ADase inserted into it.As a result of the work we have demonstrated for the first time the possibility of synthesis of ADase E. coli in the CFPS system. In a partially optimized process conditions, an experimental sample of recombinant AD with an activity of 530 U/ml of enzyme preparation was obtained.
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.