Цель. Определение овариального резерва у недоношенных девочек при рождении и в пубертатный период. Материалы и методы. Обследованы 100 недоношенных и доношенных новорожденных девочек, а также 200 девушек-подростков 15-16 лет, рожденных недоношенными и доношенными, проведены лабораторные, ультразвуковые исследования, статистическая обработка материала. Результаты. Определены показатели овариального резерва у недоношенных девочек и девушек-подростков, рожденных недоношенными. Установлены статистически значимые различия всех показателей, характеризующих овариальный резерв у недоношенных новорожденных девочек и девушек-подростков, рожденных недоношенными, по отношению к доношенным. Гипофизарные гормоны у недоношенных новорожденных девочек и девочек-подростков, рожденных недоношенными, были выше, а яичниковые гормоны-ниже. По данным ультразвукового исследования, средний объем яичников и среднее количество антральных фолликулов в яичнике у недоношенных новорожденных девочек и девочек-подростков, рожденных недоношенными, были меньшими. Заключение. Невынашивание беременности вносит изменение в формирование овариального резерва в антенатальный период. Выявленная функциональная незрелость овариального резерва у недоношенных девочек при рождении остается в постнатальном периоде. Ключевые слова: новорожденные девочки, девушки-подростки, рожденные доношенными и недоношенными, показатели овариального резерва.
Introduction: It is known that overexpression of DNA methyltransferases (e.g., DNMT1) is frequent and changes of DNA cytosine methylation (5mC) are a constant feature of cancers. DNA methylation inhibitors, such as 5-aza-2'-deoxycytidine (Dec), have been in clinics for patients with leukemia. It is classically believed that promoter hypomethylation coupled by reexpression of epigenetically-suppressed tumor suppressors is a core mechanism behind Dec-impaired leukemia cell growth. However, the fact that global DNA methylation profiling barely predicts Dec-response suggests a demethylation-independent mechanism of Dec-induced cell death. N6-methyladenine (m6A) has been identified recently as an abundant DNA modification in eukaryotes (Wu, Nature 2016;532:329). Importantly, m6A is extensively present in the human genome, and m6A abundance is associated with tumorigenesis (Xie, Cell 2018;71:306). Furthermore, the DNA m6A is dynamically modulated by the methyltransferases (i.e., METTL3, N6AMT1) and demethylases (i.e., ALKBH1), and changes in m6A predict gene expression (Wu, Nature 2016;532:329). Given a potential crosstalk between m6A and distinct epigenetic mechanisms (Yao, Nat. Commun 2017;8:1122), we hypothesized that the anticancer actions of Dec may partially result from changes in DNA m6A in leukemia cells. Methods: Protein expression of target genes was assessed by Western blotting. The levels of DNA cytosine methylation (5mC) and N6-methyladenine (m6A) were measured by dotblotting or liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS). The cell viability and apoptosis were determined by the Cell Counting Kit 8 (CCK8) assays as well as the Annexin V/Propidium Iodide staining and flow cytometry. The peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of leukemia patients from Mayo Clinic were prepared by Ficoll-Hypaque gradient centrifugation. Results: To test our hypothesis, leukemia cells, Kasumi-1, MV4-11, K562 and KU812, were exposed to 2 µM Dec, a clinical achievable concentration, for 72 hours. As expected, Dec treatment led to a downregulation of DNMT1 and DNMT3a, a reduction of 5mC levels by dotblotting using anti-5mC antibody, a blockage of cell proliferation and a promotion of cell apoptosis. When genomic DNA was subjected to dotblotting using anti-m6A antibody, the results revealed a marked decrease of DNA m6A levels in all Dec-treated cells. Then genomic DNA from K562 and MV4-11 cells was enzymatically digested to 2'-deoxynucleosides. dA was quantified by HPLC-UV, while the amount of m6A was measured by isotope dilution HPLC-ESI-MS/MS using 15N labeled internal standard. The standard curves were generated using pure standards, from which the m6A/A ratio was calculated. In agreement with dotblotting results, Dec treatment significantly decreased DNA m6A abundance in both cell lines. Mechanistically, exposure to Dec led to a consistent increase of demethylase fat mass and obesity-associated protein (FTO), but not METTL3 nor ALKBH1 and ALKBH5. Further, knockdown of FTO increased DNA m6A, which was further confirmed by treatment with FTO inhibitors rhein and meclofenamic acid (MA). These data indicate that FTO may be responsible for Dec-induced m6A changes in leukemia cells. To investigate the clinical implications of DNA m6A, we obtained PBMCs from AML patients (n = 10), who received Dec therapy (20 mg/m2 daily for 5 days every 4 weeks) in Mayo Clinic. These PBMCs were further cultured for 48 hours, frozen and stored in 100% ethanol before DNA extraction. The results from dotblotting using anti-5mC or anti-m6A showed that a trend of decrease in both m6A and 5mC abundance is observed, and the pattern of changes in m6A and 5mC displays a positive correlation. Finally, exposure of leukemia cells to the combination of Dec (2 µM) with FTO inhibitor MA (50 µM) induced more cell apoptosis and greater inhibition on cell proliferation as compared to single agent in vitro, supporting FTO inhibitors as new therapeutic agents in leukemia. Conclusion: Our studies suggest that the FTO-DNA m6A axis may partially mediate the therapeutic outcomes of Dec in leukemia. Our findings provide a new mechanistic paradigm for the anticancer activities of Dec, and define the m6A methylation status in leukemia cells as a new pharmacodynamic marker for their response to Dec-based therapy, pointing to a novel treatment strategy for incorporating m6A modulators to enhance the therapeutic index of Dec. Disclosures Al-Kali: Astex Pharmaceuticals, Inc.: Research Funding.
1 Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей -филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России (НГИУВ -филиал ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России), Новокузнецк, Россия, 654005; 2 Группа компаний «Мать и дитя», клиника женского здоровья и репродукции человека «МЕДИКА», Новокузнецк, Россия, 654041Цель исследования -оценить прогностическую значимость содержания иммунорегуляторных белков и цитокинов во внутриматочных смывах при бесплодии трубного генеза, ассоциированного с хроническим эндометритом (ХЭ) у женщин, участвующих в программах экстракорпорального оплодотворения. Материал и методы. Обследованы 38 женщин с ХЭ, разделенных по исходу программ ЭКО на подгруппы: у 17 наступила беременность, у 21 -нет; 26 женщин с трубным фактором бесплодия без ХЭ (у 13 наступила беременность, у 13 -нет); контрольную группу составили 10 здоровых фертильных женщин. Исследованы маточные смывы перед вступлением в программу на содержание α 2 -макроглобулина (α 2 -МГ), иммуноглобулина G (IgG), лактоферрина (ЛФ) и цитокиновинтерлейкинов (ИЛ)-6, -8, фактора некроза опухоли-α (ФНО-α), интерферона-γ (ИФН-γ), эндотелиального фактора роста (VEGF), методом иммуноферментного анализа, альбумина -методом ракетного иммуноэлектрофореза. Результаты. При ХЭ во внутриматочных смывах повышены концентрации α 2 -МГ (в 5,5 раза) и альбумина (в 3 раза) по сравнению с контролем, повышено содержание VEGF, снижен уровень ЛФ (в 2 раза), а при трубном факторе бесплодия без ХЭ уровень α 2 -МГ повышен в 2,5 раза, уровень ЛФ снижен в 2,5 раза. Наибольшие концентрации α 2 -МГ, альбумина, ФНО-α и IgG в смывах наблюдались при отрицательном исходе ЭКО у женщин с ХЭ. При трубном факторе бесплодия без ХЭ повышено содержание ФНО-α, снижено содержание ИЛ-8 только при отрицательном исходе ЭКО. Выводы. ХЭ приводит к изменению белкового состава внутриматочного содержимого, выраженные изменения ассоциированы с неблагоприятным прогнозом программ ЭКО. Содержание во внутриматочных смывах α 2 -МГ более 3,2 мг/л и альбумина более 0,24 г/л до вступления в программу ЭКО рекомендуется в качестве прогностического критерия низкой эффективности программы.Ключевые слова: хронический эндометрит, бесплодие, ЭКО, цитокины, α 2 -макроглобулин, альбумин.Objective -the evaluation of prognostic significance of the contents of immunoregulatory proteins and cytokines in endometrial lavage at infertility (tubal factor) associated with chronic endometritis (CE) in women participating in in vitro fertilization programs. Material and methods. Groups 38 women with chronic endometritis, divided by the outcome of IVF programs into subgroups: 17 became pregnant, 21 -did not; 26 women with tubal factor of infertility without CE (13 became pregnant, 13 -did not); control group of healthy fertile 10 women. The uterine lavages were collected before undergoing the program and analyzed for the maintenance of α 2 -macroglobulin (α 2 -MG), IgG, lactoferrin (LF) and cytokines (IL-6, IL-8, TNF-α, IFN-γ, VEGF) by ELISA, albumin -by r...
scite is a Brooklyn-based organization that helps researchers better discover and understand research articles through Smart Citations–citations that display the context of the citation and describe whether the article provides supporting or contrasting evidence. scite is used by students and researchers from around the world and is funded in part by the National Science Foundation and the National Institute on Drug Abuse of the National Institutes of Health.
hi@scite.ai
10624 S. Eastern Ave., Ste. A-614
Henderson, NV 89052, USA
Copyright © 2024 scite LLC. All rights reserved.
Made with 💙 for researchers
Part of the Research Solutions Family.